一种包装重组流感病毒的重组载体和重组流感病毒及其构建方法和应用发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 113073115 A (43)申请公布日 2021.07.06 (21)申请号 202110634158.4 A61K 39/145 (2006.01) A61P 31/14 (2006.01) (22)申请日 2021.06.08 A61P 31/16 (2006.01) (71)申请人 北京溯本源和生物科技有限公司 C12R 1/93 (2006.01) 地址 100089 北京市海淀区清河永泰庄北 路9号院内东侧一层025室 (72)发明人 宋文俊　卢帅　张东晖　李月　 (74)专利代理机构 北京高沃律师事务所 11569 代理人 苏士莹 (51)Int.Cl. C12N 15/85 (2006.01) C12N 15/44 (2006.01) C12N 15/50 (2006.01) C12N 7/01 (2006.01) A61K 39/295 (2006.01) A61K 39/215 (2006.01) 权利要求书1页 说明书10页 序列表7页 附图3页 (54)发明名称 一种包装重组流感病毒的重组载体和重组 流感病毒及其构建方法和应用 (57)摘要 本发明提供了一种包装重组流感病毒的重 组载体和重组流感病毒及其构建方法和应用，涉 及生物医药技术领域。本发明利用A型流感病毒 八个基因片段为骨架包装出带有新型冠状病毒 SARS‑CoV‑2表面刺突蛋白受体结合域（SARS‑ CoV‑2_RBD）片段的重组流感病毒，此重组流感病 毒可在复制过程中表达具有生物学活性和免疫 原性的刺突蛋白受体结合区域RBD。本发明所述 重组流感病毒rgH1N1（PR8）‑PA‑RBD可作为重组 病毒类药物，用于2019新型冠状病毒肺炎 （COVID‑19）的预防；也可作为体外SARS‑COV‑2  A RBD等相关抗原表达和体内递呈系统。 5 1 1 3 7 0 3 1 1 N C CN 113073115 A 权　利　要　求　书 1/1 页 1.一种包装重组流感病毒的重组载体，其特征在于，所述重组载体的结构包括：流感病 毒PA序列、包装信号序列、2A序列、IL2信号肽序列和外源序列； 所述重组载体以携带Pol  I和Pol  II的载体为基础载体。 2.权利要求1所述重组载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：将所述流感病毒 PA序列连接入线性化的基础载体上，得连接模板，利用in‑fusion方法，依次将所述包装信 号序列、2A序列、IL2信号肽序列和外源序列与所述连接模板进行连接，得所述重组载体。 3.一种重组载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：将BsmBI线性化的pHW2000载 体与源自A/Puerto Rico/8/1934的PA基因进行in‑fusion连接，得初级载体pHW2000‑PR8_ PA； （2）利用in‑fusion方法依次将CSPS优化序列、2A序列、IL2信号肽序列、SARS‑CoV‑2  RBD序列、CD80序列和PR8‑PA基因包装信号序