新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒的生产工艺发明专利.docxVIP

新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒的生产工艺 技术领域： 本发明涉及医学检验技术领域，尤其涉及一种新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒的生产工艺。 背景技术： 随着全球多款新冠疫苗获得批准以及疫苗接种逐步普及，疫苗接种后保护性有多好、保护期有多久等问题仍未有定论，因此疫苗效果评价成为关注热点。中和抗体是由病毒最外层的包膜或衣壳抗原刺激机体产生的一类能与病毒结合并使之丧失感染力的抗体。病毒侵入人体后，体内浆细胞会产生病毒特异性抗体，其中只有一部分是中和抗体。中和抗体作为有抗病毒活性的抗体，仅占抗病毒抗体中的少部分，中和抗体可以识别病毒表面蛋白，阻断病毒与细胞表面的特异性受体结合，进而防止病毒继续侵入人体细胞，接种疫苗后人体免疫系统将产生针对病原体的中和抗体以保护人体免受感染，因此中和抗体的检测对于评价疫苗接种后人体免疫应答水平等起到非常重要的作用。 目前传统的中和抗体检测一般繁琐复杂，业界公认的检测方法是利用活病毒进行被感染细胞的蚀斑减少计数来判断中和抗体的水平，但由于必须使用活病毒，实验室的生物安全等级要达到P3以上，试验程序复杂，对操作人员要求高，且检测通量低耗时3天或更长，这些因素导致其检测成本非常高，完全无法做大规模推广。替代活病毒的假病毒检测方法虽然在复杂性上有所改进，但仍然需要使用活细胞，仍不能达到工业化程度。因此开发简便容易操作的中和抗体检测试剂盒将大有所为，可广泛用于接种疫苗人群的中和抗体评估。新冠中和抗体检测试剂盒(胶体金法)检测试剂盒具有操作简单，无需使用活病毒，以RBD-ACE2作用机制为原理进行开发设计，无需使用活病毒，在一般的实验室即可完成检测，检测成本低，易于大规模推广使用，可用于疫苗有效性及保护期限评估，未来将为疫苗的免疫效果评价提供有力支撑。 发明内容： 本发明的目的是针对现有中和抗体检测技术的缺陷，提供一种新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒的生产工艺及检测方法，该试剂盒基于胶体金免疫层析平台，采用竞争法的反应原理进行设计开发，对生产全过程的工艺技术、质量控制、关键工序、特殊过程等内容严格把控，保证试剂盒的检测精度和灵敏度。 本发明是通过如下技术方案实现的： S1，制金 采用柠檬酸三钠溶液及氯金酸溶液按1:1的比例烧制胶体金溶液； S2，标记 采用S1制备好的胶体金溶液、按照配方量加入0.2M碳酸钾溶液进行pH调节、依次加入新型冠状病毒RBD蛋白Ag28进行标记离心，然后使用新型冠状病毒中和抗体金标重悬液将沉淀物按照50倍浓缩复溶后保存待用； 采用S1制备好的胶体金溶液、按照配方量加入0.2M碳酸钾溶液进行pH调节、依次加入鸡IgY进行标记离心，然后使用新型冠状病毒中和抗体金标重悬液将沉淀物按照50倍浓缩复溶后保存待用； S3，喷金 将新型冠状病毒中和抗体胶体金标记复合物溶液及鸡IgY胶体金标记复合物溶液按10:1混合，在玻纤金标结合垫上喷金，喷金结束后进行干燥处理； S4，划线 将新型冠状病毒中和抗体T线划线蛋白ACE2-PS-Ag2用划线工作液稀释成2.0mg/mL，振荡混匀后待用；将C线划线蛋白山羊抗鸡IgY用划线工作液稀释成1.0mg/mL，振荡混匀后待用；在PVC板表面贴合NC膜和吸水纸，随后使用三维金标划线仪在相应的管路中吸取上述配置好的C、T线划线液进行划线，划线后进行干燥处理； S5，贴板及切条 将样品垫、全血过滤垫、喷金干燥后的玻纤金标结合垫、与S4中划线干燥后的NC膜按照顺序依次叠压，贴板后进行切条，得到新冠中和抗体试剂卡条； S6，检测卡组装 将S5得到的试剂卡条置于卡壳内压装成检测卡，连同干燥剂一同装入铝箔袋封口后成为新冠中和抗体半成品试剂卡； S7，成品组装 将检测卡、说明书、加样吸管及样品稀释液装入包装盒中，检测合格后入库。 在本发明一较佳实施例中，步骤S1中， 柠檬酸三钠溶液的制备工艺如下： 在洗净并烘干的离心管中加入工艺用水，按照标准配方准确称取柠檬酸三钠二水倒入离心管中，搅拌至完全溶解，加入适量工艺用水定容并充分混匀，使用0.22μm的滤膜过滤至试剂瓶中； 氯金酸溶液的制备工艺如下： 取一支四氯金酸，加入适量工艺用水溶解，再反复冲洗将洗液倒入烧杯，直至冲洗液无色后再反复冲洗，倒入洗净并烘干容量瓶中，加入工艺用水定容，使用0.22μm的滤膜过滤； 胶体金溶液的具体制备工艺如下： 用洗净并烘干的量筒量取定量工艺用水倒入洗净并烘干的烧杯中，将烧杯置于电热炉上，加热至烧杯底部有较大气泡产生还未烧开时，一次性倒入定量准备好的1％的氯金酸溶液；加大功率继续加热至沸腾，一次性倒入准备好的1％的柠檬酸三钠溶液，待溶液变黑后开始计时，保持沸腾15分钟；然后停止加热，置于室温冷却；待溶液冷却至室温后，用工艺用水定容，倒入洗净并烘干的锥形瓶中，充分混匀。 在本发明一较佳实施例中，步骤S2中，0.2M