激光扫描共聚焦显微镜在纳米毒理学研究中的应用.pdfVIP

第３６卷 第５期 电 子 显 微 学 报 Ｖｏｌ.３６，Ｎｏ.５ ２０１７年１０月 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ Ｓｏｃｉｅｔｙ ２０１７-１０ 文章编号：１０００-６２８１（２０１７）０５-０５１７-０５ 激光扫描共聚焦显微镜在纳米毒理学研究中的应用 吴安庆，马晓川 （苏州大学放射医学与防护学院，江苏 苏州２１５１２３） 摘 要 随着激光扫描共聚焦显微镜技术的不断更新，功能不断拓展，已成为新兴学科纳米毒理学及其交叉学 科科学研究的重要工具。 激光扫描共聚焦显微镜能够动态检测纳米颗粒在活细胞内的定位及其与细胞骨架、细胞 内离子、生物大分子的相互作用，有助于深入研究纳米颗粒对机体的毒理学效应及其机制。 关键词 激光扫描共聚焦显微镜；纳米毒理学；纳米颗粒；细胞成像 中图分类号：Ｑ３３６ 文献标识码：Ａ ｄｏｉ：１０.３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１０００-６２８１.２０１７.０５.０１６ 激光扫描共聚焦显微镜与传统光学显微镜相 Ｚ 轴上不同焦平面上的点会同时受到激发产生荧 比，具有更高的分辨率和探测深度，可以对样品无损 光，但经过探测针孔时，这些杂散荧光会被遮挡，无 地进行断层扫描和三维成像，是长时程动态观察活 法到达光电探测器，也无法形成电信号，有效地避免 ［２］ 细胞、免疫荧光多标记和自发荧光材料的有力工具。 了杂散信号对目的荧光的干扰 。 另外，激光扫描 纳米技术是当今快速发展的前沿科学技术之一，纳 共聚焦显微镜系统经过一次调焦后，在样品的某一 米材料已经被广泛应用于生物医学领域，例如，医学 个平面内扫描，随着调焦的深度改变，可以逐层扫 成像的探针、药物载体、诊断试剂以及一些食品和化 描，获得Ｚ轴上多层平面的图像信息，经过计算机 妆品的添加剂等。 因此，纳米材料进入机体后产生 数字图像处理后，就能获得样品的三维立体结构图。 的生物学效应，日益得到科研人员的关注，目前已形 ２ ＦＶ１２００ 激光扫描共聚焦显微镜的 成一门新兴学科－纳米毒理学。 在纳米毒理学研究 配置 中，激光扫描共聚焦显微镜可利用荧光染料，从形态 和功能两方面对纳米颗粒进入生命体后的生物学效 Ｏｌｙｍｐｕｓ 激光扫描共聚焦显微镜 （型号： 应研究提供崭新的技术方法。 本文以苏州大学辐射 ＦＶ１２００），配有全电动倒置显微镜（型号：ＩＸ８３），显 纳米毒理学研究中心的日本奥林巴斯（ＯＬＹＭＰＵＳ）的 微镜和整个系统高度整合，能够通过触摸屏和软件 激光扫描共聚焦显微镜（型号：ＦＶ１２００）为例，阐述激 进行控制；显微镜内置电动聚焦驱动马达最小步进 光扫描共聚焦显微镜在纳米毒理学研究中的应用。 精度≤１０ ｎｍ；配有针对共聚焦显微镜应用优化的高 １ ＦＶ１２００ 激光扫描共聚焦显微镜的 分辨率、高透过率荧光、ＤＩＣ 物镜 １０ × （干镜，数值 孔径≥０.４０），２０ × （油镜，数值孔径≥０.７５），４０ × 原理 （干镜，数值孔径≥０.９５），６０ × （油镜，数值孔径≥ 与传统光学显微镜的光源不同，激光扫描共聚 １.４０）。 激光器波长为４０５ ｎｍ、４３８ ｎｍ、５１５ ｎｍ、５５９ 焦显微镜是采用单一波长的激光作为光源，其系统 ｎｍ和６３５ ｎｍ，所有激光器均通过高精度激光控