Zeiss+LSM+780激光扫描共聚焦显微镜光路设置和不同扫描模式的使用.pdfVIP

技创新与应用 2015 年第27 期 科技 创新 Zeiss LSM 780 激光扫描共聚焦显微镜光 路设置和不同扫描模式的使用 李华丽 （华南农业大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，广东 广州 510642 ） 摘 要：对于使用激光 描共聚焦显微镜的研究者来说，实验设计、样品准备、仪器操作和后期图片处理是一个实验至关重要的 四步，前两步是任何一个研究者都必须具备的能力，否则无从谈起上机实验，后期图片处理无非就是修饰润色使图片从视觉上更 美观，而对大多数从事生物学医学领域的研究者来说，仪器的操作可能是最关键的一步，而仪器操作中光路的设置和不同 描模 式的选择可能是最难掌握和最难学习的模块，因为这部分可能涉及一些物理光谱学的知识。文章就以自己实验室Zeiss LSM 780 激光 描共聚焦显微镜为例，简要介绍其三种光路设置和五种不同 描模式如何选择使用，希望对使用者有所帮助。 关键词：激光 描共聚焦显微镜；光路设置； 描模式 引言 （1）Fastest ：在各荧光物质的发射光谱不完全重叠的情况下，同 随着现代科学技术的飞速发展，各种荧光蛋白、荧光染料和精 时扫描多种荧光物质，即在一个Track 里多条激光线同时扫描，扫描 [1-5] 。（ 密光学元件不断出现 ，激光扫描共聚焦显微镜技术得到了极大的 成像速度是最快的，但可能出现信号串扰 2 ）Best Signal ：针对不同 发展，各种公司，各种型号的共聚焦系统不间断问世或完善，广泛应 荧光物质逐一进行扫描成像，即一种荧光物质使用一个Track ，每条 [6-8] 激光线顺序扫描。尽可能减少各种荧光物质发射光谱间的串扰，但 用在细胞生物学医学领域 。广泛的应用使得这一设计精密又操作 。就以蔡司公司 。（ 复杂的仪器必须让有需要的研究者方便学习和掌握 扫描成像速度会明显降低 3 ）Best Compromise ：综合考虑成像速度 为例，科学技术的发展和适应市场的需要，不同型号的共聚焦系统 和信号质量，同时扫描发射光谱重叠较少的荧光物质，即发射光谱 ， 重叠较少的荧光物质使用一个Track ，另一种物质单独使用一个 逐步上市和使用 LSM 510、510 Meta、700 、7 10、780 等在硬件技术 。文章以华南农业大学亚热 。（ 提高的同时，操作软件也在一步步简化 Track 。在减少信号串扰的 提下，在一定范围内提高成像速度 4 ） 带农业生物资源保护与利用国家重点实验室的一台超高灵敏度检 Linear Unmixing ：进行多通道荧光扫描的光路设定，用于简单的光 测Zeiss LSM 780 系统为例，介绍其光路设置和不同扫描模式的选 谱拆分。 “ ” 择，因为它是目 蔡司公司推出的上述普通激光扫描共聚焦显微镜 3 Zeiss LSM 780 激光扫描共聚焦显微镜一种 隐藏 的线扫 中型号最高的一款，它的光路设置和扫描模式的配置将集上述所有 描模式 型号系统的内置设置于一身，希望能给实验者提供较全面的指导。 软件默认的扫描模式一般为面扫描模式，即在一个track 完成 1 Zeiss LSM 780 激光扫描共聚焦