激光扫描共聚焦显微镜的基本功能及在医学各领域中的应用.pdfVIP

堂竖堡堂直篓童登掌蕉堂塑箜嚷蟛笪鲞箜量塑 激光扫描共聚焦显微镜的基本功能及 在医学各领域中的应用 张向阳赵磊 (河北省邯郸医学高等专科学校中心实验室056029) 【中图法分类号】1w7 【文献标识码】A 【关键词】 激光扫描共聚焦显微镜 功能 应用 激光扫描共聚焦显微镜是20世纪80年代发展起来的一架、结构性蛋白质、DNA、RNA、酶和受体分子等细胞内特 项具有跨时代意义的高科技新产品，使现代显微镜有能力研 异结构的含量、组分及分布进行定量、定性、定时及定位测 究和分析细胞的变化过程和结构。特别是对活细胞离子含量 定。 变化的定量检测，完拯细胞的三维立体结构图像重建等方 2．4粘附细胞的分选：细胞分选有两种方式，一种适用于 面，是传统的光学和电子显微镜所望尘莫及的。早在1957数量较多细胞的分选，即在特制的培养皿上有两类细胞，一 年MaⅣinMnsky首次阐明了扫描共聚焦显微镜技术的某些类是未作荧光染色的细胞群，另一类是作荧光染色的细胞 基本原理。1984年Bio—R丑d公司推出了世界第一台共聚焦群，利用高能激光把染色的细胞群杀死，而把未染色的细胞 显微镜商品。随后zdss、Met·dian等多家公司相继开发出不群保留并且继续培养。一种适用于数量较少的突变细胞，转 同型号的共聚焦显微镜。随着技术的不断发展和完善，产品 移细胞和杂交瘤细胞，即利用高能量激光于底部带膜的特制 的性能也不断改进和更新，应用范围也越来越广。 培养皿上在欲选细胞周围切割戚八角带，而非选细胞则田在 l基本原理 该几何形状之外而除去。 传统的光学显徽镜使用的是场光源，入射光照射到整个 2．5口H、细胞内离子分析：利用荧光探针，激光扫描共聚 标本的一定厚度，标本上每一点的图像都会受到邻近点的衍 焦艋微镜可对细胞内各种离子的含量及动态变化作毫秒级定 射光或散射光的干扰，使图像的信噪比降低，影响了图像的 时定量分析，较多的是对细胞内钙离子浓度及浓度变化的测 清晰度和分辨率。激光扫描共聚焦显微镜利用激光扫描柬经 量。利用sNAFl．类探针可对细胞内pH进行测定。 照孵针孔形成点光源对标本内焦平面上的每一点扫描，标本 2．6激光细臆显微外科手术：激光扫描共聚焦显微镜将激 上的被照射点，在探测针孔成像，由探测针孔后的光电倍增 光作“光子刀”使用，进行细胞瞬间穿孔，染色体精确切 管或冷电耦合器件逐点或逐线接受，迅速在计算机监视器屏 割，细胞器烧灼，神经元突起切除等一系列细胞外科手术。 幕上形成荧光图像，照明针孔与探测针孔相对于物镜焦平面 27光陷阱技术：该技术利用激光的力学效应将一个微米 是共轭的，焦平面上的点同时聚焦于照明针孔和探测针孔， 级大小的细胞器或其它结构钳于激光束的焦平面也可称为光 焦平面以外的点不会在探测针孔成像，这样得到的共聚焦图 钳。利用光钳移动细胞的微小颗粒和结构(如染色体、细胞 像是标本的光学横断面，克服了普通显微镜图像模糊的缺 器)进行细胞融合，机械刺激及细胞骨架弹性澍量等。 点。此外在显微镜的载物台上加一个微量步进马达，可使载 2．8细胞膜流动性测定：细胞膜荧光探针受到极化光线激 物台上下步进移动，最小步进距离为0．1}∞，这样细胞或组 发后，其发射光极性依赖于荧光分子的旋转，该旋转依赖于 织各个横断面的图像都能清楚地显示，实现“光学切片”的 膜的流动性，因此极性测量可间接反映膜的流动性．激光扫 目的。 描井聚焦显徽镜利用睾用机算机软件可对细胞膜的流动性进 2基本功能 行定量和定性分析。 2l细胞间通讯的研究：多细胞生物体中，细胞间相互影 2．9光活化技术：生物体内许多重要的活性物质和化台物 响和控制的生物学过程称为细胞问通