激光扫描共聚焦显微镜观察细菌生物膜形成的方法学研究.pdfVIP

代生物医学进展 Progress in Modern Biomedicine 2007 Vol.7 No.5 · 653 · 激光扫描共聚焦显微镜观察细菌生物膜形成的方法学研究* 陈景祥 孙凤军 刘松青 夏培元 第三军医大学西南医院药学部 重庆 400038 ） 摘要 目的：建立激光扫描共聚焦显微镜观察生物膜形成过程的方法，为进一步研究生物膜的形成机制奠 基础。方法: 以临床分 离金葡菌X428 为研究对象，在盖玻片上形成生物膜，分别于接种后的4 、8、12、16、24 和48h 取出玻片，采用免疫荧光技术标记多 （ 。 糖和细菌，激光扫描共聚焦显微镜 CLSM ）观察生物膜形成情况 结果: 取得了生物膜形成过程的不同时间点的CLSM 图像，4h ， ，多糖基质产生并逐渐增多，至 ； 时细菌在盖玻片上粘附形成小菌落 8h 和 12h 细菌聚集成簇 16h 形成成熟生物膜结构 24h 和48h 。 生物膜已经播散，其结构变小 结论: 应用免疫荧光技术和激光扫描共聚焦显微镜技术研究生物膜形成过程是一种简便可行的方 法。 ： 关键词 细菌生物膜；激光扫描共聚焦显微镜；免疫荧光技术 ： ： ： 中图分类号 R318.021 文献标识码 B 文章编号 1673-6273（2007 ）05 0653 03 Study on Method for Observation of Bacterial Biofilm Formation under Confocal Laser Scanning Microscope CHEN J ing -xiang , SUN Feng -j un, LIU Song -qing , XIA Pei-yuan （Dep artment of Pharmacy, Southwest Hospital of The Third Military Medical University, Chong qing 400038, China ） ABSTRACT Objective ：To establish the method of observation of bacterial biofilm formation under confocal laser scanning microscope (CLSM), so as to provide the basis for further study on the mechanism of biofilm formation. Methods ：X428, a clinical isolation of Staphylococcus Aureus (SA), was selected to be investigated. Cover glasses were used to culture biofilms and collected at 4th, 8th, 12th, 16th, 24th and 48th hour of incubation. Polysaccharides and bacteria were labeled by immunofluorescent technique. The condition of SA biofilm formation was observed under confocal laser scanning microscope （CLSM ）. Results ：A series of images of biofilm were collected by CLSM. Tiny colonies adhered on glasse