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激光扫描共聚焦显微镜在脑血管形态研究中的应用 四川大学华西医院神经内科(610041)黄娟 综述 周 东 审校 摘要：激光扫描共聚焦显徼镜(LSCM)是目前最先进的分子生物学分析仪器之一，本文就LSCM在脑血管疾病 的病理形态学、内皮细胞生理功能、脑部微循环、脑部炎症时血管变化的研究中的作用进行介绍。 关键词：激光扫描共聚焦显微镜；脑血管疾病 脑血管疾病是一种严重危害人民健康的常见 (“m)，不能反映一条相对完整血管的信息。而 病，其发病率、患病率、死亡率和致残率都很高。 对直径500p．m的血管，目前更是只有两种方法 随着人口的老龄化和患病人数的逐年增加，已成为 来研究其大体形态和功能：线路肌动图和灌注肌动 全球严重的社会问题和经济问题。因此加强脑血管 图。这两种方法也是用光学显微镜来观察。LsCM 疾病的研究，采取有效的防治措施和康复手段以降 可以不采用组织切片，直接作用予上述血管，逐层 低其危害是非常重要的。激光扫描共聚焦显微镜 扫描(最小步踞可达0．1岬)，对这些组织进行 (1aser confocal 无损伤的系列光学切片，得到各层面信息(这种功 scanning microscope，LSCM)是近年 来发展起来的一项具有划时代意义的高科技技 能也被形象的称为“显微CT”)。LSCM借此可 术，是当今世界最先迸的分子生物学分析仪器之 获得标本真正意义上的三维数据，经计算机图象处 一。它以荧光显微镜成像为基础，与激光扫描装置 理和三维重建软件，得到其三维立体结构。Silvia 和计算机图像处理相结合。与传统的光学显微镜不 等人的研究表明LSCM对血管形态学进行研究，其 同的是LSCM利用激光扫描束经照明针孔形成点结果较以前的方法更为准确【ll。 光源对标本内焦平面上的每一点扫描，在探测孔 Morris等人为了研究中风发生后脑部微血管灌 成像。由于照明孔与探测孔相对于物镜焦平面是共 注量的变化，建立了鼠的大脑中动脉栓塞模型，以 轭的，有效抑制了同一焦平面的荧光，使LSCM的LSCM观察栓塞后1～4小时脑部微血管直径的缩 分辨率大大提高。LSCM采用了荧光探针，可针对小程度。其结果与对照组相比，试验组的鼠脑部微 观察目标选用专门染料，得到高质量的三维图像， 更清楚观察到动物组织细胞的精细结构。LSCM他们的试验显示LSCM三维图像技术在脑血管病理 的出现为脑血管疾病的研究(目前多用于动物模 形态学方面的一个新的应用，也说明了LsCM在脑 型)提供了一种新的更好的技术手段。以下就现有 血管病理形态学的研究上尚有很大潜力121。 资料，将LSCM可以应用于脑血管疾病研究中的方Boumaza等人建立了有发生脑卒中倾向的高血压大 面加以简述。 鼠模型，用LSCM测量颈内动脉内弹力膜穿孔面 1 LSCM在脑血管形态学研究方面的瘦用 积和穿孔面积百分比，从而说明该种大鼠颈内动 脑部的动脉粥样硬化主要发生在大脑基底环 脉内弹力膜应力集中效应降低，这在有发生脑卒 (Willis环)和大脑中动脉，这些动脉属于小动中倾向的高血压大鼠是一种适应性改变D】。 脉。以前是通过光学显微镜进行观察，无论是采用 2 LSCM研究脑血管内皮细胞生理功能 冰冻切片还是用石蜡切片，切片厚度只有几个微米 内皮细胞的作用众所周知，而脑血管内皮细胞 收稿日期：2001—09—26；修回日期：200l一10—30 作者简介：黄娟(1976一)，女，重庆市人，硕士研究生，主要从事癫痫 的研究。 ·54· 万方数据 国外医学神经病学神经外科学分册 2002年第29卷第1期 由于其特殊的位置，它的生理活性对整个人体机 测量法是应用pH敏