DNA聚合酶X家族新成员—DNA聚合酶λ2功能的初步研究.docVIP

DNA聚合酶X家族新成员—DNA聚合酶λ2功能的初步研究 , ,,,,,, 学校代码:,,,,, 学 号:,,,,,,,,, 后翌大学 博士学位论文 ,,,聚合酶,家族新成员? ,,,,,聚合酶入,功能的初步研究 院 系: 生命科学院 专 业: 遗传学 姓 名: 谷 福 指导教师: 李育阳教授 完成日期: ,,,,年,月,,日 复旦大学博:卜学位论文,,,聚合酶,家族新成员一,,,聚合酶，,功能的初步研究 ? 摘 要 本研究发现并克隆了一个肝脏特异的人类,,,聚合酶基因，是,,, ,的一 个剪接体，命名为,,, ,,。该基因的;,,,长,,,,,,，包含一个,,,,,,的开 放阅读框，编码,,,个氨基酸，位于人,,号染色体长臂,,区，长约,(,,,，包 含,个外显子和,个内含子。生物信息学分析表明，,,, , ,蛋白和,,,聚合 ? 酶,家族成员高度同源，并含有这个家族特有结构域,,,,，因此是一个,,, 聚合酶,家族的新成员。该基因核苷酸序列和相应蛋白氨基酸序列已提交至 ,,,,,,,，登录号为,,,,,,,,。 亚细胞定位实验证实，,,,，,蛋白定位于细胞核:在人,,种组织中表达谱 实验表明，该基因在肝组织中特异性高表达，在其他组织中不表达或低表达:癌 和癌旁表达差异实验表明;和『,常肝组织和癌旁组织相比，在十六个癌组织的样 本中有,,,样本的,,,，的表达上调，导致,,,，,和,,,，的,,,,分子 的比例异常，可能和肝癌的病理过程有关。 ? 大肠杆菌重组表达融合蛋白,,,, ,时，通过菌株筛选，获得能高表达,,, ，,的宿主菌;通过优化条件，找到一种可以高效地使,,,，,包涵体变为可溶 蛋白的方法，对于其他蛋白表达时，减少包涵体蛋白的产生，增加可溶性，具有 参考作用。 纯化了,,,，,蛋白，经过同位素?一,,, ,,,,掺入实验，证实了,,,,,, 具有,,,聚合酶活性;在探索纯化原核表达的融合蛋白,,,，,时，建立了一 种新的高效纯化方法一脱氧核糖核酸酶纯化法，为研究,,,结合蛋白的纯化提 供了新思路。? 以,,,，,为诱饵蛋白，利用酵母双杂交(,,,,,,,,,, ,,,, ,,,—,,,,,, ,,,,,, ,)筛选了人胎肝和睾丸;,,,文库，获得了阳性克隆,,,,,,;,,;,,,,,,, ,,,;,,,,,,,, ,,,,,,,—，(,,一,),,, ,,,,,,,, ,,;,,,,,,(,,,)。 关键词:,,,聚合酶，,，蛋白纯化，,,,聚合酶活性，酵母双杂交，肝肿瘤? 复旦大学博:，:学位论文,,,聚含酶,家族新成员,,,,,聚合酶，,功能的初步研究 ，,,,,,,,;,,,,, ,,, ,,,,,;,,,,,,,,,, ,, , ,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,入, ,,,,,,;, , ,,,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,,, ,,,, ;,,,, ,,,,,,,, ,, ,,, ,，,,, ;,,,,,,,, ? ,,,,,,,,,, ,, , ,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,, , ,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,，,(,,, ,,,,(,,,,,, ;,,, ,, ,,,,, ,,,，, ,,, ,,,,,, ,,,, , ;,,,,,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,,,(,,,),, ,,,,,, ;,,,,, ,,, ,,, ,,,,, ,;,,,(,,, ,,,, ,, ,,;,,,,,, ,, ;,,,,,,,,, , ,？,,，,,, ,,,,, ,(, ,, ,,,, , ,,,,, ,,, , ,,,,,,,(,,, ,,;,,,,,,, ,,？,,,;,(,, ,,, ,,,, ,,,,,,,,, ,, ,, , ,,,,,,, ,,,, ,;;,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,( ,,, , , ,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,—,,,;,,,; ,,,,,,，,,,, ,,,,,;,,,,, ,,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,(, ,,,,,, ;,,,,,,;, ;,,,,,,,,, ,,,，, ,,, ,,,,, ,,,,,,,;,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,, , ,,,,,,,,,,,,, ,,;,,,, ,,;,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,;,,, ,,(, ;,,, ,,,,,,( ,,,, ;,,,,,,, ,, ,,,,,, ,,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,,;,,,,,,, ;,,;,,,,, ,由,;,,, ,,,,,,,， ,,,, ,