微生物实验设计报告.doc

实验原理 肠道杆菌的细菌为革兰氏阴性菌，大多数有鞭毛，能运动。少数无鞭毛不能运动，不产生芽孢，需氧或兼性厌氧，在普通培养基上，一般都生长良好，均能发酵葡萄糖产酸或产气，触酶试验阳性，氧化酶试验阴性，还原硝酸盐。 这类细菌是人类和动物肠道中的细菌，有的引起腹泻、肠炎、肠热症和痢疾等。有的为条件致病菌，有时也可引起身体各个部位的感染。 二、实验材料 1.病鸡：怀疑被大肠杆菌或沙门氏菌感染 2.培养基：半固体培养基 麦康凯平板 三糖铁高层斜面 蛋白胨水 葡萄糖蛋白胨水 3.革兰式染色试剂：草酸铵结晶紫溶液、革兰氏碘溶液、95%酒精，沙黄水溶液 4. 生化管：葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、枸橼酸盐、H2S、尿素 5. 生化试剂：吲哚试剂， MR 、VP 试剂 7.药敏实验试剂：青霉素、复方新诺明、氯霉素 三、实验内容及其安排 （一）、 制备培养基：麦康凯、半固体、三糖铁高层斜面、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水。 （二）、 解剖实验动物， 细菌分离培养：病料抹片，染色镜检。划线接种麦康凯或S·S琼脂平板。 （三）、 观察细菌培养性状，选择可疑菌落进行纯培养。普通琼脂平板、伊红美兰琼脂平板、三糖铁琼脂斜面。 （四）、观察细菌纯培养结果，细菌抹片，革兰氏染色镜检，观察细菌抹片及纯培养情况，。 （五）做生化试验、药敏试验。 （六）观察实验结果，写实验报告。 第一天：制备培养基解剖实验动物、病料抹片、细菌 分离培养 1.S.S培养基：50g S·S培养基+800ml蒸馏水，煮沸溶化浇平板（15ml/块平板），无需高压 2.麦康凯培养基 3.三糖铁琼脂 4.葡萄糖蛋白胨水：1.25g蛋白胨+1.25g葡萄糖+1.25g磷酸氢二钾+250ml水，加热溶解，调pH至7.6，分装40根短试管高压（3指半高， 约5-8ml） 5.蛋白胨水：1.25g蛋白胨+0.625gNaCl+125ml水，调pH至7.6，分装40根短试管，捆扎，高压，121℃15分钟　（2指高，约2-4ml） 6.半固体：分别称取蛋白胨5g、牛肉膏2.5g、氯化钠2.5g、磷酸氢二钾0.5g、蒸馏水500ml，加热溶解，调pH7.6，过滤 称琼脂粉2g+肉汤500ml,煮沸，待琼脂粉完全溶化，分装短试管（2指高，约2-4ml） 病鸡剖检的方法和步骤????? 一、剖检要求：?? 剖检鸡最好在死前或濒死期进行。对于已经死亡的，应尽早进行。如暂时不剖检，应暂时存放4℃冰箱内。剖检最好在实验室内进行。如在鸡场或野外进行，应选择比较偏僻和远离河流及水源的地方，以免散毒。在剖检时，最好是在盆内或垫以塑料布及厚纸，避免血液、羽毛、渗出物等散播。剖检完毕后，将尸体连同垫料一起深埋或焚烧，以防病原微生物扩散。?? ?二、剖检步骤：??? 1、先用水，最好是消毒药水浸湿尸体，以防羽毛粘手，影响操作。然后在大腿与腹壁之间各剪一剪，将大腿向两侧用力压，直至股骨头露出，使尸体平衡仰卧放置，以利剖检。?? 2、将腹壁皮肤横剪一缺口，向头侧掀开皮肤，注意肌肉有无出血或坏死。?? 3、沿腹壁至胸侧两边向前剪断肋骨。然后用力将胸骨掀开，暴露胸腹腔，观察肝脏、心脏、气囊等器官的病变。?? 4、在腺胃和食道之间剪断，用手将腹腔器官一并取出。剪开腺胃，观察腺胃的病变。剪开十二指肠、小肠后段、盲肠、泄殖腔等，并仔细观察病变。?? 5、剪开口腔、嗉囊、气管、支气管，并观察其病变。然后观察法氏囊有无病变及肾、卵巢、输卵管、肺脏等病变。?? 6、分离股肌，观察坐骨神经的病变。?? 7、脱离头皮，沿额骨前缘和眼的后方横断，自此处向两侧沿脑的轮廓向后剪开额骨，掀开，观察脑部变化。??? 三、其他：?? 在剖检肘，对死亡原因不明的病死鸡要注意全面观察，对死亡原因明确的鸡要有重点地进行剖检，以便发现特征性病变，及时作出诊断 病料抹片，染色和镜检 准备材料：载玻片、接种棒、酒精灯、火柴、吸水纸、生理盐水、各种染色液、显微镜、接种病料 抹片制备：a.取洁净玻片进行抹片操作。b.液体材料（液体培养物、血液、渗出液、乳汁）直接用灭菌接种环取一环材料，于玻片中央均匀涂布成适当大小的薄层；非液体材料（菌落、脓、粪便）先或用灭菌接种环取少量生理盐水或蒸馏水，置于玻片中央，再用接种环取少量材料，在液滴中混合，均匀涂布成适当大小的薄层；组织脏器材料用镊子夹持中部，然后以灭菌或洁净剪刀取小块，夹出后将新鲜切面在玻片上压印。c.干燥：自然干燥。d.固定：火焰固定和化学固定（血液、组织脏器） 染色：革兰氏染色：（1）在干燥固定好的玻片上，滴加草酸铵结晶紫溶液，1~2min后水洗；（2）加革兰氏碘溶液于抹片上媒染，作用1~3min，水洗；（3）加95%酒精于玻片上脱色，约0.5~1min，水洗；（4）加稀释的石炭酸复红复染10~3