《生物化学》-核酸测序技术的发展历程.pdfVIP

装 订 处 南开大学现代远程教育学院考试卷 2019年度秋季学期期末(2020.2) 《生物化学》 主讲教师： 李登文 一 、请同学们在下列（10）题目中任选一题，写成期末论文。 1、蛋白质的结构与功能关系 2、酶高效降低活化能的内在因素和作用 3、核酸测序技术的发展历程 4、导致维生素缺乏的原因和应对策略 5、胆固醇在人体内的好与坏 6、喝咖啡的减肥作用 7、人体维持血糖水平稳定的策略 8、海洋表面泄露石油的消解 9、葡萄糖-丙氨酸循环对氨转运的经济有效性 10、糖、脂、氨基酸与核苷酸代谢的相互联系 二、论文写作要求 论文题目应为授课教师指定题目，论文要层次清晰、论点清楚、论据准确； 论文写作要理论联系实际，同学们应结合课堂讲授内容，广泛收集与论文有关资料，参 考一定文献资料。 三、论文写作格式要求： 论文题目要求为宋体三号字，加粗居中； 正文部分要求为宋体小四号字，标题加粗，行间距为1.5倍行距； 论文字数要控制在2000－2500字； 论文标题书写顺序依次为一、（一）、1. 。 四、论文提交注意事项： 1、论文一律以此文件为封面，写明学习中心、专业、姓名、学号等信息。论文保存为 word文件，以“课程名+学号+姓名”命名。 2、论文一律采用线上提交方式，在学院规定时间内上传到教学教务平台，逾期平台关 闭，将不接受补交。 3、不接受纸质论文。 4、如有抄袭雷同现象，将按学院规定严肃处理。 核酸测序技术的发展历程 装 订 处 DNA 测序技术，即测定 DNA 序列的技术。在分子生物学研究中，DNA 的序列分析 是进一步研究和改造目的基因的基础。目前用于测序的技术主要有 Sanger 等 (1977)发明的双脱氧链末端终止法和 Maxam 和 Gilbert(1977)发明的化学降解 法。这二种方法在原理上差异很大，但都是根据核苷酸在某一固定的点开始，随 机在某一个特定的碱基处终止，产生 A，T，C，G 四组不同长度的一系列核苷酸， 然后在尿素变性的 PAGE 胶上电泳进行检测，从而获得 DNA 序列。目前 Sanger 测序法得到了广泛的应用。 人类基因组这部由 A、T、G、C 四个字母组成的卷帙浩繁的生命天书如同一座宝 库，保藏着几千年来人们迫切想知道的秘密，DNA 测序技术就好似芝麻开门这 样的咒语，是我们打开宝库的金钥匙世界上第一个测定 DNA 序列的方法是由英国 生化学家弗雷德里克·桑格尔发明的。自此 DNA 测序的速度就一直呈加速态势。 2001 年人类基因组草图耗资 4.37 亿美元，耗时 13 年。到了 2007 年，第一个完 整人类基因组序列图谱的诞生只花费了 150 万美元，3 个月就搞定。2009 年 1 月 2 日，美国加州太平洋生物科学公司的科学家乔纳斯·考尔拉赫、斯蒂芬·特纳 及其研究小组在 《科学》杂志上发表论文称，他们将纳米技术与芯片技术相结合， 发明了一种新型测序方法，速度是现有技术的 3 万倍。 Sanger 法测序的原理就是利用一种 DNA 聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的 引物。直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应 构成，每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸 (dNTP)，并混入限量的一种不同 的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP 缺乏延伸所需要的 3-OH 基团，使延长 的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T 或 C 处终止。终止点由反应中相应的双脱氧而 定。每一种 dNTPs 和 ddNTPs 的相对浓度可以调整，使反应得到一组长几百至几 千碱基的链终止产物。它们具有共同的起始点，但终止在不同的的核苷酸上，可 通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段，凝胶处理后可用X- 光胶片放 射自显影或非同位素标记进行检测。 Promega 公司的 SILVER SEQUENCETM DNA测序系统是一种无放射性的序列分析系 统，它通过灵敏的银染