9组织培养第九章植物脱毒技术.pptx

第九章 植物脱毒技术宜职院08.9目的与要求 了解脱毒意义，学习植物茎尖脱毒原理及其操作程序，了解其他组织脱毒方法及应用，掌握植物理化脱毒方法。学习植物脱毒苗的鉴定方法，掌握各方法的鉴定原理，了解植物脱毒苗的保存和繁殖方法。 具备植物茎尖脱毒技术基础，具有指示植物鉴定脱毒苗的基本能力，有脱毒苗保存的认知。 全世界已发现植物病毒有近788种。 病毒的危害： 组织和细胞病变 新陈代谢等生理机能受到干扰 外观表现不正常状态 由于危害可通过营养体传给后代，病毒对寄主植物可造成毁灭性危害，导致大幅度减产，甚至全株死亡。世界作物生产中，病毒危害程度仅次于真菌。 危害一些植物的病毒数目植物种类感染病毒种类植物种类感染病毒种类植物种类感染病毒种类菊花19矮牵牛5苹果36康乃馨11百合6柑橘23水仙4马铃薯17葡萄26唐菖蒲5大蒜24草莓24风信子3豌豆15桃23月季10樱桃44梨11 所谓脱毒就是采用一定的方法除去植物体内病毒的技术。 无病毒苗：指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物体内的存在表现阴性反应的苗木。应用植物脱毒技术意义 植物脱毒技术可使植物恢复原来优良特性，生长势增强，明显提高产量、改善品质，产量的提高幅度最高可达300%。 植物脱毒技术不仅脱除了病毒，还可以去除多种真菌、细菌及线虫病害，使种性得以恢复，植株生长健壮，减少肥料和农药施用量，降低生产成本，保护了环境 第一节 脱毒方法一、茎尖培养脱毒（一）通过茎尖培养脱毒的原理 1、病毒在植物体内的分布 病毒浓度不同，离尖端越远病毒浓度越高。茎尖或根尖，离体培养便可获得无病毒再生植株。 2、茎尖大小与脱毒 茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。茎尖分生组织不能合成自身需要的生长素，但下部叶原基能提供，因而带叶原基的茎尖生长快，成苗率高。但茎尖越大，脱毒效果差。（二）茎尖脱毒方法1、取样与消毒 可直接选定的植株上取顶芽进行消毒接种。采顶芽与侧芽消毒接种 。 消毒方法是：剪取顶芽梢段3、5厘米，剥去大叶片，用自来水冲洗干净，在75%酒精中浸泡30秒左右，用1%-3次氯酸钠或5%-7%的漂白粉溶液消毒10-20分，最后用无菌水冲洗材料4-5次。酒精擦拭手外植体消毒浸泡5min器械消毒酒精灯灼烧酒精擦拭培养皿2、茎尖剥离和接种 将已消毒的芽放在带滤纸的培养皿上—器械固定—解剖镜下剥去幼叶—切下带1-2个叶原基的生长点（0.3-0.5mm）—切下的茎尖转至培养基上（顶部向上）。显微镜下获取茎尖酒精擦拭旋转灼烧接种盖好瓶塞脱毒马铃薯试管苗3．培养 25+2℃ ，1500-5000LX，10-16h 一般光照培养比暗培养效果好。其间应更换新鲜培养基。提高培养基中BA的浓度可形成大量从生芽。4．生根诱导 诱导生根的方法是将2-3cm高的无根苗转入生根培养基继续培养1-2个月可生根。 （三）培养基与培养方式 1、培养基：MS， White , Morel等 2、培养方式：一般采用半固体培养基。（四）影响茎尖脱毒效果的因素（茎尖脱毒技术的关键） 植物种类、病毒种类、剥离茎尖的大小（0.3-0.5mm带1-3个叶原基）、培养基营养 用于脱毒的适宜茎尖大小植物病毒名称剥离茎尖大小（mm）植物病毒名称剥离茎尖大小（mm）马铃薯马铃薯卷叶病毒马1.0～3.0百合花叶病0.2～1.0铃薯Y病毒1.0～3.0鸢尾花叶病0.2～0.5马铃薯X病毒0.2～0.5菊花各种病毒0.2～1.0马铃薯G病毒0.2～0.3康乃馨各种病毒0.2～0.8马铃薯S病毒0.2以下大丽花花叶病0.6甘薯斑纹花叶病毒1.0～2.0大蒜花叶病毒0.3～1.0缩叶花叶病毒1.0～2.0甘蔗花叶病0.7～3.0羽毛状花叶病毒0.3～1.0草莓各种病毒0.2～1.0二、热处理脱毒 脱毒原理 即热处理脱毒，一些病毒对热不稳定，在高于常温的温度下（35-40度）即钝化失活。 1、温汤浸渍处理脱毒法 材料置于50℃左右热水中浸渍几十分钟到数小时。 特点：简单易行，成本低，但易使材料受伤。适用：甘蔗、木本植物和休眠器官的处理。 2、热空气处理脱毒法 将植物用35～40℃的热空气处理2～4周或更长时间。特点：损伤较小，操作简便，须严格控制温度时间适用：多数植物 3、热处理结合茎尖培养脱毒 目前常采用将热处理和茎尖分生组织培养结合起来的方法脱毒。特点：既可缩短热处理时间，提高植株成活率，又可剥离较大的茎尖，提高茎尖培养的成活率和脱毒率。适用：大多数植物，并可除去一般培养难以去除的纺锤块茎类病毒 三、其他组织培养脱毒方法（一）愈伤组织培养脱毒 将感染病毒的组织离体培养获得愈伤组织，再诱导愈伤组织分化成苗，从而获得无病害毒植株的方法，即愈伤组织培养脱毒法。 部分愈伤组织细胞不带病毒可能有以下两方面的原因：一是愈伤组织细胞分裂增殖