仪器分析第七章 液相色谱分析.pptxVIP

第七章 高效液相色谱法 High Performance Liquid Chromatography，HPLC 液相色谱仪（1）液相色谱仪（2）液相色谱仪（3）高压液相色谱对于挥发性低、热稳定性差、分子量大的高分子化合物以及离子型化合物的分离尤为有利。如氨基酸、多肽、蛋白质、生物碱、核酸、甾体、类脂、维生素、抗菌素等均可进行分离分析定量。生物材料和生物体液是目前所知道撮复杂的化学物质的混合物，所含成分在一万种以上，其分子量从18到几百万，而且其中有意义的化学成分的含量又往往很低，因此，必须要有一种高分辨、高灵敏度的分离鉴定手段，气相色谱和高压液相色谱具有以上特点，它们可通过对生物样品和生物体液样品的有关成分的提取、分离、分析定量，进行对疾病的早期快速诊断的研究，病理病因的研究，以及药物在体内代谢的研究……等。它们将以高选择性、高分离效能、高灵敏度、高速度等特点，为您提供准确可靠的研究指标。尤其是高灵敏度方面，它们可以检测出10-910-12克的痕量物质，能达到这个检测量的分析方法并不多见。因此，气相色谱和高压液相色谱是从事生物科学和医学研究的一个很有用的手段。第一节 高效液相色谱法概述一、理论基础：速率理论A为涡流扩散项B/u分子扩散项Cu项即传质阻力项二、HPLC技术 采用高压输液泵，高效微粒固定相和高灵敏度检测器。三、HPLC特点 高压、高速、高效、高灵敏度、样品回收方便。?经典LCHPLC柱之内径1~5cm~0.4cm长度50~100cm15~50cm填充材料粒度150μm~200μm4μm~10μm使用压力1~10atm50~200atm分离时间0.5h~天~10min㈠经典LC与HPLC比较㈡与气相色谱法比较，HPLC的优点分析对象广 气相色谱只限于分析气体和沸点较低的化合物；HPLC不受样品挥发性和热稳定性的限制，适用于高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质。原则上讲，几乎可以分析除永久气体外所有的有机和无机化合物。 ⒉流动相对分离起作用 气相色谱的流动相仅起运载作用，对组分不产生相互作用力；HPLC的流动相对组分产生相互作用力，相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数。⒊经常在室温条件下操作 气相色谱法一般在较高温度下进行缺点：仪器设备费用昂贵，操作严格。第二节 高效液相色谱仪 高效液相色谱仪由 高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统 等五大部分组成。1.储液瓶（输液管入口端安装有过滤器）；2.高压输液泵；3.混合器和阻尼器；4.进样器（阀）；5.色谱柱；6.检测器；7.废液瓶；8.数据处理和控制系统 贮液器输液泵进样装置分离柱检测器梯度装置控温装置HPLC仪器结构示意图工作过程： 首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经过进样器送入色谱柱，然后从控制器的出口流出。当注入欲分离的样品时，流经进样器贮液器的流动相将样品同时带入色谱柱进行分离，然后依先后顺序进入检测器，记录仪将检测器送出的信号记录下来，由此得到液相色谱图。一、高压输液系统 高压输液系统由 溶剂贮存器、高压泵、梯度洗脱装置和压力表 等组成。 1.溶剂贮存器 溶剂贮存器一般由玻璃、不锈钢或氟塑料制成，容量为1到2 L，用来贮存足够数量、符合要求的流动相。2.高压输液泵 高压输液泵是高效液相色谱仪中关键部件之一，其功能是 将溶剂贮存器中的流动相以高压形式连续不断地送入液路系统，使样品在色谱柱中完成分离过程。对泵的要求：输出压力高、流量范围大、流量恒定、无脉动，流量精度和重复性为0.5%左右。此外，还应耐腐蚀，密封性好。恒流泵是能给出恒定流量的泵，其流量与流动相粘度和柱渗透无关。 高压输液泵，按其性质可分为恒压泵和恒流泵两大类。 恒压泵是保持输出压力恒定，而流量随外界阻力变化而变化，如果系统阻力不发生变化，恒压泵就能提供恒定的流量。3. 梯度洗脱装置 梯度洗脱就是在分离过程中使两种或两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变它们之间的比例，从而使流动相的强度、极性、pH值或离子强度相应地变化，达到提高分离效果，缩短分析时间的目的。仅用弱溶剂仅用强溶剂梯度洗提梯度洗脱装置分类 一类是外梯度装置（又称低压梯度），流动相在常温常压下混合，用高压泵压至柱系统，仅需一台泵即可。 一类是内梯度装置（又称高压梯度），将两种溶剂分别用泵增压后，按电器部件设置的程序，注入梯度混合室混合，再输至柱系统。 二、进样系统 进样系统包括进样口、注射器和进样阀等，它的作用是把分析试样有效地送入色谱柱上进行分离。通常使用耐高压的六通阀进样装置,其结构如图所示：三、分离系统 色谱柱是液相色谱的心脏部件，它包括柱管与固定相两部分。柱管材料有玻璃、不锈钢、铝、铜及内衬光滑的聚合材料的其他金属。柱管材料：耐腐蚀耐压内径：2.0、3.0、4.1、4.6mm长度：5、10、15