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DNA提取中各种实验试剂作用原理 DNA提取中各种实验试剂作用原理 DNA提取中各种实验试剂作用原理 DNA提取中各种实验试剂作用原理 1、STE 是 Tris-Hcl 、EDTA、Nacl 的混杂液 。其整体作用是为 DNA供应保护环境，在此环 境下 DNA能够呈牢固态，最少限度地碰到破坏。 Tris.HCl 供应缓冲系统， DNA在这一系统中呈牢固态。 EDTA：是 DNA酶的控制剂，能够防范细胞破碎后 DNA酶降解 DNA。 NaCl，有利于 DNA的溶解。 2、SDS的作用：利用高浓度的阴离子去垢剂 SDS〔十二烷基磺酸钠， Sodium dodecyl sulfate 〕 使 DNA 与蛋白质分别，在高温〔 55～ 65℃〕条件下裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性， 释放出核酸，尔后采用提高盐浓度及降低温度的方法使蛋白质及多糖杂质沉 淀，离心后除 去积淀， 3、苯酚的作用：使蛋白质变性，同时控制了 DNase的降解作用。用苯酚办理匀浆液时，由 于蛋白与 DNA 联系键已断，蛋白分子表面又含有好多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子 溶于酚相，而 DNA溶于水相。 使用酚的优点：  1. 有效变性蛋白质；  2. 控制了  DNase的降解作用。 缺点：  1.  能溶解  10-15%的水，从而溶解一局部  poly  〔 A〕 RNA。 2.  不能够完好控制  RNase的 活性。 Tris 酚的颜色，一般为黄色。若是变成粉红色，说明被氧化，不能够再用。 4、氯仿的作用 战胜酚的缺点；加速有机相与液相分层。 最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。 〔酚易溶于氯仿中〕 5、异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇能够降低表面张力，从而减少 气泡产生。 别的，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含 DNA的水相、 中间的变性蛋白相及 基层有机溶剂相保持牢固。 6、用乙醇积淀 DNA时，为什么参加单价的阳离子？ 用乙醇积淀 DNA时，平时要在溶液中参加单价的阳离子，如 NaCl 或 NaAc ，Na+中和 DNA分 子上的负电荷，减少 DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于齐聚积淀。 7．为什么在保存或抽提 DNA过程中，一般采用 TE 缓冲液？ 在基因操作实验中， 选择缓冲液的主要原那么是考虑 DNA的牢固性及缓冲液成分不产生搅乱作 用。磷酸盐缓冲系统〔 pKa＝ 7.2 〕和硼酸系统〔 pKa=9.24 〕等诚然也都吻合细胞内环境的生 理范围  (pH) ，可作  DNA的保存液，但在转变实验时，磷酸根离子的种类及数量将与  Ca2＋产 生 Ca3(PO4)2 积淀，在  DNA反响时， 不同样的酶对辅助因子的种类及数量要求不同样，  有的要求 高离子浓度，有的那么要求低盐浓度，采用 Tris-HCl 〔 〕的缓冲系统，由于缓冲液是 TrisH+/Tris  ，不存在金属离子的搅乱作用，故在提取或保存  DNA 时，多半采用  Tris-HCl 系统，而  TE 缓冲液中的  EDTA更能牢固  。 8、STE 是  Tris-Hcl  、EDTA、Nacl  的混杂液  。其整体作用是为  DNA供应保护环境，在此环 境下 DNA能够呈牢固态，最少限度地碰到破坏。 Tris.HCl 供应缓冲系统， DNA在这一系统中呈牢固态。 EDTA：是 DNA酶的控制剂，能够防范细胞破碎后 DNA酶降解 DNA。 NaCl，有利于 DNA的溶解。 9、SDS的作用：利用高浓度的阴离子去垢剂 SDS〔十二烷基磺酸钠， Sodium dodecyl sulfate 〕 使 DNA 与蛋白质分别，在高温〔 55～ 65℃〕条件下裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性， 释放出核酸，尔后采用提高盐浓度及降低温度的方法使蛋白质及多糖杂质沉 淀，离心后除 去积淀， 10、苯酚的作用：使蛋白质变性，同时控制了 DNase的降解作用。用苯酚办理匀浆液时，由 于蛋白与 DNA 联系键已断，蛋白分子表面又含有好多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子 溶于酚相，而 DNA溶于水相。 使用酚的优点：  1. 有效变性蛋白质；  2. 控制了  DNase的降解作用。 缺点：  1.  能溶解  10-15%的水，从而溶解一局部  poly  〔 A〕 RNA。 2.  不能够完好控制  RNase的 活性。 Tris 酚的颜色，一般为黄色。若是变成粉红色，说明被氧化，不能够再用。 11、氯仿的作用 战胜酚的缺点；加速有机相与液相分层。 最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。 〔酚易溶于氯仿中〕 5、异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇能够降低表面张力，