发酵液预处理办法和固液分离方式.pptVIP

第七章发酵液预处理办法和固液分离方式 第七章发酵液预处理办法和固液分离方式 杂蛋白去除-沉淀法 1）沉淀法 调等电点 因羧基的电离度比氨基大，所以大多数蛋白质的等电点都在酸性范围(pH4.0-5.5) 但仅靠调等电点还不能使大部分蛋白质沉淀 蛋白质是两性物质，在酸性溶液中，能与一些阴离子物质如三氯乙酸盐、水杨酸盐、钨酸盐等形成沉淀；在碱性溶液中，能与一些阳离子如Ag+、Cu 2+、Zn 2+、Fe 3+、等 形成沉淀 2）变性法 变性蛋白溶解度较小 最常用加热法 加热不仅能使蛋白变性，还可降低液体黏度，提高过滤速率； 其他方法： 大幅度调节pH，加酒精、丙酮等有机溶剂或表面活性剂 变性法存在一定的局限 如加热法只适用于对热较稳定的目的产物；极端pH也会导致某些目的产物失活，且需消耗大量酸碱。 3）吸附法 加入某些吸附剂或沉淀剂吸附杂蛋白而将其除去 如四环素生产中，采用黄血盐和硫酸锌的协同作用生成亚铁氰化钾的胶状沉淀来吸附蛋白； 在枯草芽孢杆菌发酵中，加入氯化钙和磷酸氢二钠，两者生成庞大的凝胶，把蛋白质、菌体及其他不溶性粒子吸附并包裹在其中而除去 第七章发酵液预处理办法和固液分离方式 收集胞内产物的细胞或菌体，分离除去液相； 收集含生化物质的液相，分离除去固体悬浮物。 固液分离的目的： 第七章发酵液预处理办法和固液分离方式 ? 发酵后期要少加消泡剂和少进行补料，防止消泡剂和未用完的培养基增加过滤难度； ? 菌体自溶前放罐可防止因菌体自溶释放出的代谢产物增加发酵液黏度 1）菌体细胞体积 ? 真菌菌丝体较粗大，质量比阻小，发酵液不需经特殊处理就很容易过滤； ? 放线菌菌丝细而分支，交织成网格状，质量比阻力大，较难过滤，发酵液需经预处理，凝固蛋白质等胶体物质，提高过滤速度； ? 细菌菌体更小，发酵液如不经絮凝等预处理，很难用常规过滤设备进行过滤操作。 2）培养基组成 黄豆饼粉、花生饼粉等会增加过滤难度 3）放罐时机 二、影响发酵液固液分离的因素 第七章发酵液预处理办法和固液分离方式 常见的固液分离方法 过滤 filtration 离心 Centrifugation 膜分离 membrane separation 双水相萃取 ATPS 扩张床吸附 EBA 第七章发酵液预处理办法和固液分离方式 （一） 过 滤 filtration 借助于过滤介质，在一定的压力差作用下， 使悬浮液中的液体通过介质的孔道，而固体颗粒被截留在介质上，从而实现固液分离的单元操作。 第七章发酵液预处理办法和固液分离方式 1、滤饼过滤： 适用于： 滤布，滤饼达到一定厚度起过滤作用。 固体含量0.1g/100ml 介质： 第七章发酵液预处理办法和固液分离方式 过滤推动力： 悬浮液自身压强差、重力 悬浮液表面加压 过滤介质下方抽真空 离心力 过滤阻力： 介质阻力 滤饼阻力 第七章发酵液预处理办法和固液分离方式 2、过滤介质选择 应具有足够的机械强度和尽 可能小的流动阻力。 第七章发酵液预处理办法和固液分离方式 过滤介质-织物介质 又称滤布，应用最广泛，包括由棉、麻等天然纤维滤 布和合成纤维滤布。 ?? 最高温度℃ 密度 (kg／m3) 吸水率％ 耐磨 棉 尼纶 涤纶 92 105—120 145 155 114 138 16-22 6.5-8.3 0.04-0.08 良 优 优 ? 滤? 液 澄清度 阻力 滤饼中 含? 水 滤饼 脱落 寿命 堵孔 倾向 平纹 斜纹 缎纹 依 次 降 依 次 降 依 次 减 依 次 易 中 长 短 依 次 易 第七章发酵液预处理办法和固液分离方式 过滤介质-粒状介质 有硅藻土、珍珠岩粉、细砂、活性炭、白土等。 用于固相含量极少的悬浮液 最常用的是硅藻土，是优良的过滤介质。 硅藻土过滤介质通常有三种用法： （1）作为深层过滤介质。截留效果可达到1μm。 （2）作为预涂层。保护孔道不被固体粒子堵塞。 （3）用作助滤剂。 第七章发酵液预处理办法和固液分离方式 硅藻 第七章发酵液预处理办法和固液分离方式 过滤介质-多孔固体介质 ??? 如多孔陶瓷、多孔玻璃、多孔塑料等，可加工成板状或管状，孔隙很小且耐腐蚀，常用于过滤含有少量微粒的悬浮液。 第七章发酵液预处理办法和固液分离方式 典型过滤设备： 按操作方式分类： 按操作压强差分类： 实验室用抽滤装置 板框压滤机（间歇操作） 转筒真空过滤机（连续操作） 过滤式离心机 3、固液分离过滤设备 间歇过滤机、连续过滤机 压滤、吸滤和离心过滤 第七章发酵液预处理办法和固液分离方式 1）实验室用抽滤装置 第七章发