第七章-放射免疫分析技术和免疫放射分析技术.pptVIP

2021/9/12 * 3、精密度 无论RIA或IRMA,都是以精密度来衡量分析方法本身质量好坏的指标之一,亦称重复性。它是对分析方法的随机误差的描述,反映了用该分析方法对同一样品进行多次测定时,测定值的标准差（s）和变异系数（CV）来表示。标准差表示各个测定值与均值的偏离程度,偏离度越大,表示均值的代表性越小。 2021/9/12 * 4、准确度 准确度是指测量值与真值符合的程度。 RIA和IRMA也都是以准确度为指标,来衡量分析方法本身的质量。 准确度和精密度是两个独立的统计学指标,因为有的分析尽管精密度很高,但准确度不一定好,但如准确度很好,则精密度必定也好。 2021/9/12 * 5、稳定性 有放射免疫分析中,稳定性是指不同的时期各批测定结果之间精密度的变异程度,可用批间变异系数表示。 影响稳定性的因素主要是各种试剂在规定的存放条件下,非特异结合（NSB）、最大结合率（B0）,回归系数,ED25,ED50,ED75值、质控血清测定值与标准值的偏差等指标是否均在允许范围之内。 2021/9/12 * IRMA的稳定性较好,当应用标记抗体的浓度远大于1/K时,K的影响就很小了。因为IRMA中标记抗体是过量的,无论温度、加样误差和非特异性均影响很小,所以IRMA的批内批间变异也都很小,这也是IRMA重要优点之一。 2021/9/12 * 6、有效性 RIA和IRMA都有一个临床应用有效性的问题,但往往强调方法学而忽视临床符合率。实际上无论哪种分析方法,都是为临床应用所制备的,如果失去这种意义,可以说该试剂盒一无用处。为此对厂家来说应该建立两个标准,一是试剂盒质量标准,二是临床符合率标准。 2021/9/12 * 免疫放射分析技术 1986年Miles和Hales建立了免疫放射性分析法,由于它应用标记抗体作示踪剂,在反应系统中加入过量的抗体,待测物（或标准品）和放射标记抗体进行全量反应,故其灵敏度有明显的提高,可提高6～10倍。 自单克隆抗体应用于免疫放射分析,使本法得到了更快的发展,近几年来又引入亲和素－生物素系统的放大作用,使得免疫放射分析的灵敏度有明显的提高,国内外供应的超灵敏免疫放射试剂盒就是利用此原理制成的。 2021/9/12 * 免疫放射技术突出的优点是:抗体易于碘化标记,不改变抗原的免疫活性（因为抗原不标记）,反应速率快（因为抗原抗体是全量反应）,灵敏度高（测定从零的基准开始,且引入了生物素－亲和素放大系统）工作范围宽,特异性高（因为应用单抗）、操作更简单（由于各种固相抗体的使用）。 2021/9/12 * 此法是利用标记抗体来测定待测抗原,为了与放射免疫分析区别,故称免疫放射分析（immunoradiometric assay IRMA）,免疫放射分析的反应系统是非竞争性的全量反应,故亦称非竞争性免疫分析法。 一、基本原理 放射性核素标记在抗体上,然后以过量的标记抗体与待测抗原结合,未结合的标记抗体通过和固相的抗原免疫吸附剂反应而除去,溶液中放射性与未知抗原浓度呈相关,这是经典的IRMA法,近年来发展有双位点IRMA以及在双位点IRMA基础上的标记第三抗体法,双标记抗体法和IRMA－BAS法等更为完善。IRMA法的基本数学模型同样遵循质量作用定律,其式如下: （b）2+{1+Ka·[Lo]-Ka[Bo]} ·b-Ka[Bo]=0 2021/9/12 * (一)上式与竞争性分析的数学模型基本相同,是以b为函数的一元二次方程式,在直角坐标纸上,几何图形也是双曲线,b值随Ka·[Lo]和[Bo]而变化,在一给定的IRMA中,Ka为一常数,而[Bo]为过量结合剂,[Lo]即待测抗原,b值随[Lo]值变化,b随[Lo]变,[Lo]越大,b也越大。 （二）标记抗体浓度对剂量反应曲线的影响 从图1－21可知,亲和常数Ka相同的抗体,抗体含量越大,曲线欲达到饱和时需要更多的抗原,这说明曲线的可测范围越宽。但应指出,由于标记抗体量的增加,游离标记抗体也会增多,分离时将有明显的分离误差,使NSB升高,因此测量的灵敏度将下降,所以抗体最佳浓度应通过实验来选择。 2021/9/12 * 2021/9/12 * （三）亲和常数Ka与剂量反应曲线的关系 从图1－22可见,Ka越小,相同量的抗体,其剂量反应曲线斜率越低,同时Ka值增加到一定程度,再提高Ka值对曲线斜率影响已很小,从图1－22可见,Ka小时,对过量抗体不易达到饱和,但可用的测定范围变宽,Ka较大时,曲线形状表现不对称。 2021/9/12 * 二、IRMA法分类 经典的IRMA法时待测抗原或标准品先与过量标记抗体反应形成标记抗体－抗原复合物,未结合的标记抗体通过与固相抗原吸附剂反应除去,测定上清放射性。近年来,IR-MA法的发展极为迅速,由于它的突出优