生物技术制药第六章植物细胞制药.pptxVIP

第六章 植物细胞制药 ;第一节 概 述 ; 人们利用植物作为药物已有几千年的历史，尤其是我国对中草药的应用。近年来，随着对植物药物的重视程度的不断提高，人们力图从植物中寻找高效、低毒和廉价的药物，以攻克许多危害人类健康的疾病，癌症、爱滋病等 高等植物的次生代谢产物是丰富多样的，在医药、食品、化工和农业等许多领域作为原料已得到应用。我们所利用的植物代谢产物多为混合物，所以掌握其比例很关键，对于单一成分的活性物质，人们企图通过化学合成的方法来制备，但由于收率低、费用高、化学合成困难，并且需要进行异构体的拆分，使得合成难以进行。目前，植物仍然是多种活性化合物的最丰富的来源。由于植物的生长周期长，代谢成分复杂等因素的限制，利用植物获得大量活性物质也受到影响，现在，通过植物细胞的大量培养可以解决这一问题。现阶段植物细胞的培养技术还很不完善，成本较高，今后如何提高单位培养基中有用物质的产量、降低目的产物的生产成本就成为利用植物细胞培养技术生产天然药物并实现工业化生产的关键所在。包括改进培养条件、筛选高产细胞株、研制适合于植物细胞大量培养的新型生物反应器 ;二、基本概念 ;2.悬浮培养 ;3.细胞培养 ;4.分生组织培养 ;5.外植体 ;6.器官形成 ;7.无性繁殖 ;8.突变体; 由最初的外植体上切下的新增殖的组织，培养一代称为“第一代培养”，连续多代的培养就称为继代培养 继代培养有时也称为连续培养，但“连续培养”多用于不断加入新的培养基，并连续收集培养物，以保持平衡而进行的长期不转移的悬浮培养技术 ;10.次级代谢和次级代谢产物 ;二、植物细胞培养的发展简史 ;第二节 植物细胞的形态和生理特性 ;一、形态 ;二、结构特征 ;三、细胞后含物和生理活性物质 ;四、植物培养细胞的生理特性 ;第三节 植物细胞培养的基本技术 ;一、植物材料的准备 ;二、培养基及其组成 ; 无机盐中含有大量元素和微量元素。30mg/L为界限，大量有氮、硫、磷、钾、镁、钙、氯、钠。微量有铁、锰、碘、钼、铜、锌。磷的消耗很快，但机体自身可产生磷可满足需要，氮常以铵盐或硝酸盐形式提供。钾、镁、钙离子对细胞代谢必不可少；镁离子参与多种辅酶和激活子的合成；钾离子、钙离子可抑制某些酶的活性，有时钙离子也可保持某些酶的活性或稳定性。微量元素的作用是参与辅酶的形成，并可诱导酶的合成;2.碳源;3.植物生长调节剂 ;4.有机氮源 ;5.维生素;三、培养方法 ; 固体培养包括琼脂培养和固定化培养 优点：简便易行、所占空间小 缺点：①随着培养的进行，培养基中营养物质产生浓度差，进而导致愈伤组织生长不平衡 ②外植体基部插入培养基中，该处气体交换不畅，阻碍了组织呼吸正常进行，同时植物生长过程中排出的有害物质的堆积会影响生长 ③由于重力作用或光线的入射局限性，导致愈伤组织细胞间出现极化现象，结果导致细胞群体不均匀状态 ④改变培养条件后，固体培养物的一些生理生化指标有时会发生改变; 培养温度为25℃左右；常需光照，16h/d，光强几百~几千LX。由于植物组织在培养基上生长时要不断消耗养分、散失水分和累积代谢产物，因此外植体在培养周左右必须移至新鲜培养基上，以保持继续生长。移换一次培养基成为一次继代培养，经过一定次数的继代培养，其培养物可用于悬浮培养。液体培养系统包括悬浮培养和成批培养，半连续和连续培养。悬浮培养有静止培养和振荡培养 ;（1）定义：将培养基一次性地加入反应器，接种、培养一定时间后收获细胞的方式 （2）生物反应器（图6-3）：最适于植物细胞培养的当属气升式反应器 优点：用通气代替搅拌，避免了使用机械搅拌所致的细胞破碎、通气受限制、培养物 易被污染等缺点，细胞产量也明显提高 另外，在植物细胞培养过程中，由于次级代谢产物的大量累积发生在细胞生长稳定期，人们设计了植物细胞的两步培养法；即使用两个反应器，第一个用于细胞生物量的累积，第二个用于次级代谢产物的生产（两个反应器中培养基的营养组分不同） 如日本科学家就是利用此方法开发出了世界上第一个植物细胞工程商品——紫草素。通过提高第二个反应器中Ca2+浓度的方法，大幅度增加了培养液中紫草素含量，从而实现了利用生物工程法生产紫草素的工业化;定义：在反应器中投料和接种培养一段时间后，将部分培养液和新鲜培养 液进行交换的培养方法 半连续培养可看成是一种具有定时进出装置的成批培养系统。当培养进行到一定阶段时，每天或每隔两天收获一部分培养物，然后加入新鲜培养基，通过调整收获细胞的数量和次数来保持细胞重量的恒定;3.连续培养法;4.固定化培养法;第四节