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基于半导体聚合物纳米粒子探针的比率型活性物种检测——推荐一个研究型综合化学实验 半导体聚合物纳米粒子(Semiconducting Polymer Nanoparticles，SPNs)是由疏水性半导体聚合物通过纳米组装的方法制备，并能直接分散在水溶液中的一种新型纳米材料活性氧物种(Reactive Oxygen Species，ROS)是指机体内或者自然环境中含氧并且性质活泼的物质的总称。常见的ROS包括H传统单信号输出的检测方法易受到检测过程中环境因素的干扰。与之相比，通过多信号输出的比率型检测方法，可使用多种不同信号相互参照，提高检测的准确度，进而有望消除因探针浓度、光漂白、检测设备等因素所造成的数据失真。因此，该方法在细胞和动物活体水平进行目标物检测方面有着广泛应用前景。本实验基于半导体聚合物(PFODBT)对ROS的高稳定性，将PFODBT作为信号参考分子，利用染料分子(IR775s)对ROS响应性变化的特性；将IR775s作为响应分子，并通过纳米共沉淀法制备了有机聚合物纳米探针(SPNs)。该纳米探针通过比率型吸光度和比率型荧光的方法，实现对溶液中的ROS(ClO1 实验目的1) 掌握纳米共沉淀法制备有机纳米粒子的原理、方法及表征手段。2) 了解比率型吸光度和荧光检测方法的基本原理、优势及在分析检测中的应用。3) 了解紫外-可见吸收光谱仪和荧光光谱仪的结构和测量原理，掌握仪器基本操作方法。4) 学会使用分析软件处理和分析实验数据(比率型计算以及检测限计算方法)。2 实验原理2.1 纳米共沉淀法制备有机纳米粒子的原理如图1所示，本实验中使用有机半导体聚合物分子(聚[2,7-(9,9-二辛基芴)-alt-4,7-双(噻吩-2-基)苯并-2,1,3-噻二唑]，简称PFODBT)、荧光染料分子(2-[2-[2-(2.2 比率型吸光度法的检测原理根据现有文献报道，低浓度的ROS(ClO2.3 比率型荧光法的检测原理荧光能量共振转移(FRET)是距离很近的两个荧光分子间产生的一种能量转移现象。当两个荧光分子的距离在10 nm以内，并且供体分子的发射光谱与受体分子的吸收光谱重叠时，两者可产生FRET，使得供体的荧光强度降低，而受体发射的荧光强度增强3 试剂与仪器3.1 实验试剂聚[2,7-(9,9-二辛基芴)-alt-4,7-双(噻吩-2-基)苯并-2,1,3-噻二唑] (PFODBT)，2-[2-[2-氯-3-[2-(1,3-二氢-1,3,3-三甲基-2H-吲哚-2-亚基)-亚乙基]-1-环己烯-1-基]-乙烯基]-1,3,3-三甲基-3H-吲哚鎓氯化物(IR775Cl)，Pluronic F127 (F127)购于Sigma-Aldrich。3-巯基丙酸购于梯希爱(上海)化成工业发展有限公司。二甲亚砜(DMSO)、三乙胺、无水Na3.2 实验仪器50 mL圆底烧瓶、血清瓶(5 mL、50 mL)、100 KD MWCO超滤管。其他大型仪器见表1。4 实验步骤4.1 IR775s的合成将IR775Cl (519.55 mg，1.0 mmol)，3-巯基丙酸(265 μL，3.0 mmol)和三乙胺(425 μL，3.0 mmol)依次加入到10 mL的DMSO (二甲亚砜)溶液中，之后在室温条件下将混合溶液搅拌20 h。然后，加入二氯甲烷，并用氯化钠饱和溶液洗涤整个混合液系统，分液后得到有机相。再将有机相经无水Na4.2 IR775s水溶液的配制在分析天平上准确称取1 mg的IR775s固体于1.5 mL离心管中，加入1 mL DMSO，配成1 mg?mL4.3 ROS溶液的配制ONOO为了配制ClO4.4 制备有机纳米粒子(SPNs)有机纳米粒子按文献报道过的方法合成4.5 透射电镜(TEM)和动态光散射(DLS)表征TEM样品的制备：用移液枪吸取SPNs溶液，滴在一个干净平滑的铜网片表面，使铜网片均匀的布满一层润滑的样品溶液，在红外灯照射下干燥铜网，直至铜网片表面的溶液完全干燥，再使用TEM进行观察。动态光散射制样：将4 μL的100 μg?mL4.6 比率型检测溶液中ROS为了检验纳米探针的可行性，我们首先测试了IR775s水溶液和PFODBT纳米颗粒分别对ROS的响应。检测ClO检测ONOO4.7 实验过程中的注意事项1) 纳米探针在合成以及长期储存时，需要避光，避免探针分子分解；2) 由于使用某些有机溶剂，实验操作需要在通风条件下进行；3) 除去四氢呋喃时，旋转蒸发时间应在10 min以上，以尽量除净四氢呋喃。5 结