药物分离与纯化技术等电点沉淀法分离牛乳中的酪蛋白盐析法分级分离蛋白质=.pdfVIP

药物分离与纯化技术课程 盐析法分级分离蛋白质 药物分离与纯化技术课程 生物分离过程的一般流程 药物分离与纯化技术课程 知识目标 熟悉盐析法的原理、特点及其影响因素 掌握盐析法的具体操作方法及其注意事项 技能目标 能熟练地进行盐析操作 熟知盐析法的影响因素，并能对分离方法进行评价 药物分离与纯化技术课程 盐析 概念：在高浓度的中性盐存在下，蛋白质（酶）等生物大分子物质 在水溶液中的溶解度降低，产生沉淀的过程。 与变性区别？ 不同于变性，盐析是可逆的，而变性是不可逆的。 早在1859年，中性盐盐析法就被用于从血液中分离蛋白质，随后又 在尿蛋白、血浆蛋白等的分离和分级中使用，得到了比较满意的结 果。 药物分离与纯化技术课程 盐析法特点： 1. 成本低，不需要特别昂贵的设备。 2. 操作简单、安全。 3. 不会引起蛋白质变性，经透析去盐后，能得到保持生物活性 的纯化蛋白质。 4. 分辨率不高，分离效果不理想，通常只是作为初步的分离纯 化，还需要结合其它的纯化方法。 药物分离与纯化技术课程 （一）盐析法原理 （1 ）破坏水化膜 ，分子间易碰撞聚集 ，将大量盐加到蛋白质溶液中 ，高浓度 的盐离子有很强的水化力 ，于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失 ，使 蛋白质分子因热运动碰撞聚集。 （2 ）破坏水化膜 ，暴露出憎水区域 ，由于憎水区域间作用使蛋白质聚集而沉淀 ， 憎水区域越多 ，越易沉淀。 （3 ）中和电荷 ，减少静电斥力 ，中性盐加入蛋白质溶液后 ，蛋白质表面电荷 大量被中和 ，静电斥力降低 ，导致蛋白溶解度降低 ，使蛋白质分子之间聚集而 沉淀。 药物分离与纯化技术课程 在等电点状态的 PH＞PI，带负电荷， 酶蛋白，水膜未脱， 又有水膜是稳定的 PH＜PI，带正电荷， 是不稳定的亲水胶体 亲水胶体 又有水膜，是稳定的 亲水胶体 _ _ + + _ _ + + + H + OH- + _ _ _ _ + + _ _ + + + + + - + H