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2021/1/12 开机需准备试剂 建议首次试机防止进展大量试验，仅需准备以下样品 〔1〕Negative Control〔不加任何抗体〕。 〔2〕CD3-FITC〔FL1 单染〕 〔3〕CD19-PE〔FL2 单染〕 〔4〕CD3-FITC /CD19-PE〔FL1/FL2 双染〕。 流式细胞术简介 流式细胞术简介流式细胞术简介流式细胞仪是什么仪器，什么时候会用到？22021/1/12 2021/1/12 流式细胞仪是什么仪器，什么时候会用到？ 2021/1/12 年 1月20日 1月23日 2月2日 2021/1/12 2021/1/12 2021/1/12 流式细胞术 流式细胞术〔Flow Cytometry, 简称FCM〕是一种可以快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒〔通常是细胞〕的多项特性的技术，同时可以对特定群体加以分选 研究对象为生物颗粒，如各种细胞、染色体、微生物、及人工合成微球等 研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并加以定量 2021/1/12 BD FACSCalibur 2021/1/12 2021/1/12 流式细胞仪可检测到的细胞参数 非荧光信号 颗粒度 细胞大小 前向角散射光〔FSC〕细胞相对大小及其外表积 侧向角散射光〔SSC〕细胞颗粒度及细胞内细胞器的相对复杂性 2021/1/12 血液涂片 2021/1/12 外周全血细胞散射光双参数点图 2021/1/12 Review Question Dead cells are known to be smaller and to exhibit more internal complexity than live cells. Which of the populations on this plot would you expect to be dead? 2021/1/12 2021/1/12 流式细胞仪可检测到的细胞参数 荧光信号 2021/1/12 图 Annexin V/PI双标记分析细胞凋亡和坏死 2021/1/12 Two-Color Cell Analysis Which of the three populations has the most Ab A binding sites? Ab A Ab B 2021/1/12 样本处理 2021/1/12 细胞悬液的制备 细胞悬液： 别离PBMC、PRP等：操作复杂，别离、离心步骤导致细胞特定群体丧失，并可能引入某些误差 直接使用外周血、骨髓：最接近生理状况，操作简便，样本用血量小 灌洗液、体腔积液 培养细胞、细胞系 实体组织： 病理组织：新颖样本/石蜡包埋样本 针吸组织：新颖样本 鞘液、洗液等：清洁无颗粒杂质〔.22滤膜〕 2021/1/12 植物样本的制作 2021/1/12 2021/1/12 步骤一： 选择适宜的荧光染料 必须被流式细胞仪上所装备激光器所激发 激发光谱在仪器上滤光片可以承受范围内 荧光素光谱的重叠应当尽量减少 2021/1/12 Optics 488 nm 635 nm 2021/1/12 步骤二： 染色 体积 温度 孵育时间 对照 2021/1/12 步骤三： 数据搜集和分析 画图 寻找目的细胞 调整仪器设置到适宜的状态 我们可以得到怎样的结果？它们意味着什么？ 2021/1/12 散点图 密度图 二维等高图 直方图 图 报告中常见的几种流式细胞图 2021/1/12 仪器设置调节 用未染色细胞 调整仪器PMT电压 2021/1/12