细胞工程第五章生物制品生产改.pptx

第五章 生物制品生产;主要内容;第一节 细胞大规模培养;一、细胞培养的操作方式;1、分批式培养;分批式培养特点;;2、半连续式（流加式）培养 ;3、流加式培养;4、连续灌注式培养;连续灌注式培养特点;;开放式连续培养----细胞随排出培养液一起流出且速度恒定。在稳定状态下流出细胞的速率等于培养系统中新细胞的增长速率。 封闭式连续培养----新鲜培养液和老培养液以等量方式进出，而收集的细胞重新放入原培养系统中继续培养，故培养系统中细胞数量是在不断增加的。 ;;二、大规模细胞培养方法;机械搅拌式(Spinner);该系统优点： （1）设计简单，操作方便，易于放大生产； （2）细胞密度高，达到107/mL以上； （3）便于无菌操作，不易污染； （4）氧的转换率高，能满足细胞在生长时所需的要求。 缺点： 对细胞损伤较大，产物含量不高。;气升搅拌式; 工作原理 反应器运转时，圆筒以30-60 r/min的速度转动，由于离心力的作用，搅拌器中心管内产生负压，使搅拌器外培养基流入中心管，沿管螺旋上升，再从导流筒口排出，从搅拌器外沿下降，形成循环流动。在气腔内气体由分布管鼓泡，气体溶于液体中，依靠气腔丝网外液体的循环流动及扩散作用，使溶于液体中的气体成分均匀地分布到反应器内。;Celltech公司采用气升式反应器培养杂交瘤细胞，生产单克隆抗体。生产周期为14~400h。从10L逐级放大到10000L。17d生产抗体100g，抗体合成大多数处于稳定期和衰退期，比传统摇瓶提高约5倍。;通气搅拌式细胞培养反应器;;;旋转式细胞培养系统;该反应器是将细胞种植到微载体后，将其移入RCCS圆柱状的培养容器内，加满培养液。整个容器由电机驱动沿水平轴旋转，细胞微载体颗粒在水平轴内建立均质的液体悬浮轨道，并随容器一起旋转且不与容器壁和其它物体相撞。细胞通过膜式气体交换器来吸氧和排出CO2。 由于系统无推进器、气泡或搅拌器,使破坏性应力减到最小。因此，细胞可以在相对温和的环境中进行三维生长，得到类似人体内的培养产物. 近年来已经广泛应用于微载体系统，至今已有近百种组织细胞均在该系统内成功进行了大规模扩增。;;悬浮培养;微载体培养;理想??微载体所具备的性能： 质地柔软，微球间摩擦轻； 耐高温，可高压灭菌； 透明性，便于观察细胞生长； 细胞相容性，利于贴附和生长； 无毒性和惰性，对细胞无毒害，不产生有害物质，不吸附培养基； 低速即悬浮，静止即沉降，便于换液和收获； 微粒大小均匀；可回收重复使用。; 为了提高贴壁能力，对基质表面进行包埋，如血清蛋白、多聚赖氨酸处理，可加速贴壁过程。 悬浮培养早期，还可向培养液补充丙酮酸、腺嘌呤、次黄嘌呤、胸腺嘧啶等。 将这些微载体悬浮在培养液中，大大增加细胞的贴壁面积，可使每毫升培养基达到1000万个（108）细胞的密度。;常用微载体;多孔微载体： 直径0.2～5 mm，孔径20～300 μm，达占总体积的85%，极大地增加了比表面积，可实现细胞的固定化，达到高密度培养。 广泛使用的有：Cellsnow、Cytocell（纤维素基质）、Verax、Cultisphere（胶原）、Cytoline 1和2（聚苯乙烯）、ImmobaSil（硅橡胶）及Siran（玻璃）等。 主要用于搅拌、固定床和流化床反应器。;;微囊化培养; 1） 细胞在微胶囊内生长，既吸收外界营养，又可排出自身代谢物。 2）细胞所受的剪切力损伤小， 细胞生长良好，纯度提高。便于连续培养，提高培养细胞的利用率； 3）细胞培养密度高，生长缓慢，有利于次生代谢产物的积累，提高产量。;4）次生代谢物直接分泌到培养液中，可简化分离、收获步骤，提高工作效率。如次生代谢物不分泌， 培养结束后，收获微囊，破微囊，纯化抗体。 5）固定化细胞的氧气、营养供应与传递及细胞的遗传稳定性等问题有待于进一步研究解决。 这种培养方法是生产单克隆抗体、干扰素的一种有效培养方法。目前，美国药用产品大规模生产常用此法进行。;;;中空纤维（微导管）培养;; 细胞分泌的产物和血清中的成分由于分子量较大而无法进入内室，产物只能在外室积累和浓缩。 细胞代谢的废物是小分子物质，可渗透进入内室，从内腔开口排出，避免了对细胞的毒性。 在收获时，打开纤维管之间的外室开口，产物就流出来。此时虽然细胞停止分裂，但细胞的存活、健康和核形态不变，代谢和分化功能仍可保持数月。;第二节 动物细胞生物制药; 常见的动物细胞培养产物 ;基因工程药物生产示意图;一、表达目的蛋白的宿主系统;原核表达系统----细菌;真核表达系统;表达系统的选择; 口蹄疫疫苗生产示意图;过去使用动物生产的生物制品，经常发生过敏反应或