微生物的接种、分离和培养.pdfVIP

实验六 微生物的接种、分离和培养 一、目的要求 1．理解和掌握微生物接种、分离基本技术的原理及操作要领。 2．熟悉微生物接种、分离 的无菌操作过程。 3．了解微生物需氧培养的方法。 4．学会观察和描述微生物的各种培养性状。 二、实验原理 1.微生物接种 指将微生物纯种或含菌材料转移到另一营养基质上的过程。 根据不同的目的 可采用的不 同的接种方法，如平板划线法、斜面划线法、浸洗法、涂布法、倾注法、穿刺法、点 植法和 影印法。 2. 微生物分离 指依据微生物的特征， 采用各种方法从含菌样品中获得由单一个体 （如单一菌体或孢子） 或一段菌丝生长繁殖形成的微生物群体的过程。 常用的分离方法有： 平板划线法、 稀释涂布 平板分离法、稀释倾注平板分离法和单细胞分离法。 平板分离法的基本原理包括两个方面： 1 （ ）选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养、酸碱度、温度和氧等要求或加入 某 种抑制剂造成只利于该微生物生长， 而抑制其他微生物生长的环境， 从而淘汰一些不需要的 微 生物。 2 （ ）微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。 因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。 值得指出的是从微生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。 因 此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定， 有些微 生物的纯培养要经过一系列的分离与纯化过程和多种特征鉴定方能得到。 3. 微生物培养 指微生物被接种到营养基质后， 在一定条件下生长繁殖的过程， 分需氧培养法和厌氧培 养法。本实验所做的需氧培养法，是采用生化培养箱和恒温摇床进行的。 4. 微生物的培养形状 培养性状是微生物在培养基上所表现的群体形态和生长情况。 平板菌 落特征、 斜面和液 体培养特征、半固体穿刺培养特征等培养性状，是鉴定微生物的重要形态学 依据。 菌落是由单个或少数细胞在固体培养基表面或里面生长繁殖所形成的内眼可见的子细 胞群 体。 菌落形态会因菌种不同或菌种相同但所用培养基、 培养温度和时间等条件不同而存 在不同 程度的差异。 若所用培养基、 培养温度和时间等条件相同， 则同一种菌所形成的菌落 形态具 有相对的稳定性和专一性。 三、实验材料 1.菌种 大肠杆菌 (Escherichia coli)，枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis )，金 黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus) ，啤酒酵母( Saccharomyces cerevisiae)，热 带假丝酵母 ( Candida tropicalis )，毛霉 (Mucor sp.)，根霉( Rhizopus sp.)，黑曲 霉，青霉 (Penicillium sp.)，混合菌 液。 2. 培养基 营养琼脂斜面和平板，半固体营养琼脂直立柱， PDA 斜面和平板。 3. 接种工具 接种环，接种针，涂布棒，无菌吸管等。 4. 其他 酒精灯，生化培养箱等。 四、实验方法与步骤 (一)实验项目 接种前的准备： 接种的试管、 培养皿等应做好标记， 注明菌种的名称， 日期、 接种者 等。 表 6-1 实验项目 验目 所用培养基 菌 实项 称 名 用量 黄 球菌 营 1 盖 掀 皿 皿 1 平 平 取 后 板 金 . 线 法划 母带 假 酵 责