微生物限度检验方法验证方案样本.pdfVIP

微生物限度检查办法验证方案 1.合用范畴 本方案合用于我司各品种微生物限度检查办法验证。 2.目 通过验证确认所采用办法适合于该药物微生物限度测定 。 3.职责 项目负责人：负责验证方案起草及详细实行。 验证管理员：负责验证工作组织、协调及管理。 QA现场监控员：负责验证明行过程中监督检查，取样，保证成果可靠性。 QC负责人：负责验证方案中检查办法审核及按照规定取样筹划对原则检查操作程序精确执 行，负责组织实行。 QC检查员：负责验证方案起草与参加实行，并对所测数据精确性负责。 质量部经理：负责验证方案及报告审核和批准。 4.内容 4.1.概述 通过验证以确认所采用办法适合于该药物细菌、霉菌及酵母菌测定；确认所采用办法适合于 该药物控制菌检查。依照样品特性制定检查办法和检查条件，按制定办法进行实验，依照验 证成果判断与否符合验证原则。若符合，按验证办法和条件进行药物微生物限度检查；若不 符合，重新建立制定检查办法和检查条件，再进行验证，直至验证成果符合设立验证原则。 4.2细菌、霉菌及酵母菌计数办法验证 当建立药物微生物限度检查时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数办法验证，以确认所采用办 法适合于该药物细菌、霉菌及酵母菌测定。.验证明验可与供试品细菌、霉菌及酵母菌计数同 步进行。 4.2.1.验证用菌株及菌种规定 大肠埃希菌【CMCC （B）44102】、金黄色葡萄球菌【CMCC （B）26003】、枯草芽孢杆菌 【CMCC （B）63501】、黑曲霉【CMCC （F）98003】、白色念珠菌【CMCC （F）98001】。 大肠埃希菌为革兰氏阴性菌，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，枯草芽孢杆菌为产芽孢杆菌， 前述菌株作为细菌计数验证用菌株；黑曲霉为霉菌，白色念珠菌为酵母菌，作为霉菌及酵母 菌计数验证用菌株。 验证明验所用菌株传代次数不得超过5 代 （从菌种保存中心获得冷冻干燥菌种为0 代）， 并采用适当菌种保藏技术，以保证明验菌株生物学特性。 4.2.2.验证菌菌液制备 4.2.2.1.大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌菌液制备：接种大肠埃希菌、金色葡萄 球菌、枯草芽孢杆菌新鲜培养物至10ml 营养琼脂培养基中，35～37℃培养18～24 小时。取 -6 -7 此培养液1ml 加0.9%无菌氯化钠溶液9ml ，采用10 倍递增稀释法，稀释至10 ~10 ，制成每 1ml 含菌数50～100cfu 菌悬液。 4.2.2.2. 白色念珠菌菌液制备：接种白色念珠菌新鲜培养物至10ml 改良马丁培养基中，23～ 28 ℃培养24～48 小时；取此培养液1ml 加0.9%无菌氯化钠溶液9ml，采用10 倍递增稀释法， -6 -7 稀释至10 ~10 ，制成每1ml 含菌数50～100cfu 菌悬液。 4.2.2.3.接种黑曲霉新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，23～28℃培养5～7 天，加入3～ 5ml 0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱，吸至无菌试管内，取1ml 加0.9%无菌氯化钠溶液9ml， -4 -6 采用10 倍递增稀释法，稀释至10 ~10 ，制成每1ml 含孢子数50～100cfu 孢子悬液。 4.2.3. 供试液制备 4.2.3.1.无抑菌活性供试品供试液制备 ◆稀释剂：pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 ◆液体供试品：供试品10ml 置锥形瓶中，加入90ml 稀释剂，混匀，作为供试液（1：10）。 ◆固体、半固体、粘稠性供试品供试品： 称取供试品10g 置锥形瓶中，加稀释剂至 100ml， 混匀后，作为供试液（1：10）。 4.2.3.2.具备抑菌活性供试品供试液制备 当供试品具备抑菌活性时，须先消除抑菌活性，其办法如下： ◆培养基稀释法：取供试液2ml，每0.2ml 供试液注一皿或每0.1ml 供试液注一皿；或取供试 液1ml 每0.5ml 供试液注一皿，倾注15ml 培养基，测定细菌、霉菌及酵母菌菌数，混匀，凝 固，培养。每1ml供试液所注平皿生长菌数之和即为1ml菌落数。计算每1ml供试液平均菌 落数， 按平皿法计数规则报告菌数；控制菌检查时可加大增菌液用量。 ◆离心沉淀集菌法：取一定量供试液，3000转/分离心20