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基因工程基因工程的概念基因工程是指根据人们的愿望,进行严格的设计,通过,给予生物以,制造出;基因工程是在上进行设计和施工的,又叫做;(一)基因工程的基本工具1. “分子手术刀”——( 1)来源:主要是从中分别纯化出来的;( 2)功能:能够识别双链DNA分子的某种的核苷酸序列,并且使每一条链中部位的两个核苷酸之间的断开,因此具有性;( 3)结果:经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式:和;2. “分子缝合针”——(1) 两种 DNA连接酶(E· coliDNAT
基因工程
基因工程的概念
基因工程是指根据人们的愿望,进行严格的设计,通过
,
给予生物以
,制造出
;
基因工程是在
上进行设计和施工的,又叫做
;
(一)基因工程的基本工具
1. “分子手术刀”——
( 1)来源:主要是从
中分别纯化出来的;
( 2)功能:能够识别双链
DNA分子的某种
的核苷酸序列,并且使每一条链中
部位的两个核
苷酸之间的
断开,因此具有
性;
( 3)结果:经限制酶切割产生的
DNA片段末端通常有两种形式:
和
;
2. “分子缝合针”——
(1) 两种 DNA连接酶(
E· coliDNA
T4- DNA连接酶)的比较:
连接酶和
①相同点:都缝合
键;
②区分: E·coliDNA
,只能将双链 DNA 片段互补的
连接酶来源于
之间的磷酸二酯
T 4DNA 连接酶能缝合
键连接起来;而
,但连接平末端的之间的效率较
;
(2) 与 DNA聚合酶作用的异同
:DNA 聚合酶只能将
加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二
酯键; DNA连接酶是连接
的末端,形成磷酸二酯键;
3. “分子运输车”——
( 1)载体具备的条件:①
;
②
;
③
;
( 2)最常用的载体是
, 它是一种 暴露的、结构简洁的、独立于
,并具有
DNA
的双链
分子 ;
( 3)其它载体:
( 二) 基因工程的基本操作程序第一步:1. 目的基因是指:;2. 原核基因实行_和获得,真核基因是;人工合成目的基因的常用方法有_;3.PCR 技术扩增目的基因( 1)原理:( 2)过程:第一步:加热至90~ 95℃;其次步:冷却到 55~ 60℃,;第三步:加热至 70~ 75℃,;
( 二) 基因工程的基本操作程序
第一步:
1. 目的基因是指:
;
2. 原核基因实行
_和
获得,真核基因是
;人工合成目的基因的常用方法有
_
;
3.PCR 技术扩增目的基因
( 1)原理:
( 2)过程:第一步:加热至
90~ 95℃
;
其次步:冷却到 55~ 60℃,
;
第三步:加热至 70~ 75℃,
;
其次步:
1. 目的:使目的基因在受体细胞中
,并且可以
,使目的基因能
够
;
2. 组成:
+
+
+
( 1)启动子:是一段有特别结构的
,位于基因的
,是
识别和结合的部位,能驱
动基因
,最终获得所需的
;
( 2)终止子:也是一段有特别结构的
,位于基因的
;
( 3)标记基因的作用:是为了鉴定受体细胞中
,从而将
挑选出来;
常用的标记基因是
;
第三步:
1. 转化的概念: 是目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维护稳固和表达的过程;
2. 常用的转化方法:
将目的基因导入植物细胞:采纳最多的方法是
,其次仍有
和
等;
将目的基因导入动物细胞:最常用的方法是;此方法的受体细胞多是;将目的基因导入微生物细胞:原核生物作为受体细胞的缘由是,最常用的原核细胞是,其转化方法是:先用处理细胞,使其成为,再将溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在肯定的温度下促进DNA分子,完成转化过程;感受态细胞吸取3. 重组细胞导入受体细胞后,挑选含有基因表达载体受体细胞的依据是;第四步:1. 第一要检测,方法是采纳;2. 其次仍要检测,方法是采纳;3. 最终检测,方法是从转基因生物中提取,用相应的进行;4. 有时仍
将目的基因导入动物细胞:最常用的方法是
;此方法的受体细胞多是
;
将目的基因导入微生物细胞:原核生物作为受体细胞的缘由是
,
最常用的原核细胞是
,其转化方法是:先用
处理细胞,使其成
为
,再将
溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在肯定的温度下促进
DNA分子,完成转化过程;
感受态细胞吸取
3. 重组细胞导入受体细胞后,挑选
含有基因表达载体受体细胞
的依据是
;
第四步:
1. 第一要检测
,方法是采纳
;
2. 其次仍要检测
,方法是采纳
;
3. 最终检测
,方法是从转基因生物中提取
,用相应的
进
行
;
4. 有时仍需进行
的鉴定;如
;
(三)基因工程的应用
1. 植物基因工程:
;
2. 动物基因工程:
;
3. 基因治疗:
;
(四)蛋白质工程的概念
蛋白质工程是指以
作为基础,通
过
,对现有蛋白质进行
,或制造一种
,以满意人类的
生产
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