实验一油镜的使用和细菌形态观察及革兰氏染色.ppt

* 实验一油镜的使用和细菌形态观察及革兰氏染色 第一页 实 验 要 求 坚持课前预习 不迟到，不早退，更不能无故缺课； 严格按正确规范实验方法进行实验，作好记录； 保持实验室整洁 注意安全 事实求是地、独立地写好实验报告 第二页 实验报告 姓名、班级和学号 实验题目 实验原理（略写） 实验操作（ （略写） 实验结果 画图 文字描述 分析和讨论 思考题 第三页 实验一、显微镜油镜的使用和细菌形态的观察、细菌的革兰氏染色 教学目标或要求： 巩固和掌握显微镜油镜的正确使用； 学习细菌制片和单染色技术； 对人体微生物染色检查，初步建立无菌操作的概念。 学习细菌的革兰氏染色方法 第四页 显微镜油镜的使用 油镜头的识别和重要参数 油镜物镜的工作原理 油镜的使用方法和注意事项 第五页 油镜头的识别和重要参数 放大倍数 数值孔径 工作距离 第六页 油镜物镜的工作原理 使用油质作为玻片与接物镜之间的介质——油浸系 可以增加显微镜的放大倍数 可以增加视野的照明度 可以增大显微镜的分辨率 第七页 油镜的使用方法和注意事项 1、用低倍镜对光。最大光圈 2、低倍镜观察（寻找观察目标）。适当缩小光圈 3、高倍镜观察（选取理想的观察目标）。 4、油镜观察：高倍镜观察后- 上升镜筒-油镜转至正下方，在载玻片上加一小滴油-小心地下降镜筒使镜头浸在油里-用粗螺旋将镜筒缓慢上升，寻找目标（物象）用细螺旋调节，使物象清晰-观察记录。最大光圈 5、观察完毕。上升镜筒，转动物镜转换器，使油镜物镜偏位。用干净擦镜纸擦去镜头上的油迹，再取一张擦镜纸醮上二甲苯擦去镜头上残留的香柏油，最后再用一张干净的擦镜纸擦去残留在镜头上的二甲苯。 6、将显微镜各部分还原，放回箱中。 第八页 细菌的制片与染色 单染色 复染色 第九页 染 料 ①碱性染料（basic dye）—带正电染料。其阳离子部分为发色基团，可与细胞中带负电的组分结合。如结晶紫沙黄, 甲基蓝,碱性复红等。 ②酸性染料（Acid dye）—带负电染料。其阴离子部分为发色基团，可与细胞中带正电的组分结合。如刚果红、酸性复红 等。 ③脂溶性染料—如Sudan black。 多数染料都是中性有机盐。据着色基的不同可分为以下类型： 第十页 涂片 干燥 固定 染色1~2min 水洗、吸干 镜检 细菌的单染色 第十一页 步骤： 结果: 阳性菌——紫色 阴性菌——红色 结晶紫初染 碘液媒染 乙醇脱色 番红复染 涂片固定 由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。 革兰氏染色法（Gram Stain） 第十二页 革兰氏染色法 操作步骤 涂片——干燥——固定 结晶紫1min——水洗 I-KI 1min——水洗 95%乙醇脱色约10~20s——水洗 沙黄或石炭酸复红 1min——水洗 干燥——镜检 第十三页 革兰氏染色注意事项 p45 第十四页 实验内容 1、用美蓝对苏云金芽孢杆菌进行单染色，在显微镜油镜下观察形态； 2、用混合涂片的方法对大肠杆菌、苏云金芽孢杆菌进行革兰氏染色 3、自选材料：用牙签挑取牙垢观察 第十五页 实验报告 绘出革兰氏染色后大肠杆菌和苏云金芽孢杆菌的形态图并说明染色结果 思考题：你认为那些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？如何使你的染色结果可信？ 第十六页 第十七页 第十八页 * * * 菌体蛋白的等电点pI为4～5,在pH﹥pI的条件下，带负电。 ★The Gram reaction The Gram reaction is named after the Danish physician, Christian Gram, who developed this staining technique in 1884. It involves a series of simple steps. 1.??? Bacterial cells are dried onto a glass slide and stained with crystal violet, then washed briefly in water. 2.??? Iodine solution is added so that the iodine forms a complex with crystal violet in the cells. 3.??? Alcohol or acetone is added to solubilise the crystal violet - iodine complex. 4.??? The cells are counterstained with safranin, then rinsed