实验一生长谱法.ppt

实验一生长谱法 第一页 实验一用生长谱法测定微生物的营养要求 第二页 一、目的要求 学习并掌握生长谱法测定微生物营养需求的基本原理和方法。 第三页 二、基本原理 微生物的生长繁殖需要适宜的营养环境； 在缺乏某种营养物质的、含有指示剂的培养基上接入某种微生物，再在接菌平板上置入这种营养物质，经一定条件培养后 , 即可通过指示剂变化情况来判断对不同营养物质的利用情况。 该法可以定性、定量地测定微生物对各种营养物质的要求，在微生物育种、营养缺陷型鉴定以及饮食制品质量检测等诸多方面具有重要用途。 第四页 三、实验器材 菌种 大肠杆菌 (Escherichia coli) 、 枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)、 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) 培养基（ 合成培养基） (NH4 )3 PO4 1 g, KCl 0.2 g, MgSO4 ·7H2O 0.2 g, 豆芽汁 10 mL, 琼脂 20 g, 蒸馏水定容至 1L pH 7.05,加入 12mL 0.04%的溴甲酚紫作指示剂 (pH5.2～6.8) , 将颜色由黄色调为紫色。1 ×105 Pa灭菌 25 min。 溶液和试剂 A—葡萄糖、B—乳糖、C—麦芽糖、D—蔗糖、E—木糖、F—半乳糖。 器具 无菌培养皿、吸管、镊子、牙签、酒精灯、接种环等 , 另备试管无菌水 6支。 第五页 四、操作步骤 配制培养基 制作糖浸片 将圆形打孔器 (d=0.8 cm) 打下的滤纸片 , 置入不同糖的饱和溶液中浸泡 10 min后 , 取出置 28℃培养箱中烘干备用 (最好置紫外灯下灭菌 20 ～ 30min)。 制备菌悬液 在已培养 24h的大肠杆菌 (E.coli) 等 3种斜面内分别倒入5ml无菌水，用接种环轻轻刮下菌苔，振荡，制成菌悬液。 制平板 混菌法——在无菌平板内加入上述菌悬液(1ml菌悬液/10ml培养基），倒入溶化冷却至50OC左右的合成培养基，轻轻摇匀。 涂布法——将溶化冷却至50OC左右的合成培养基倒入无菌培养皿，待其凝固后，加入0.5ml菌悬液，用玻棒涂布均匀。 第六页 对照：培养基+菌0+糖0（1） 处理： 培养基+菌+糖（3混菌，3涂布） 培养基+菌+糖0（3，混菌或涂布） 培养基+菌0+糖（1） 第七页 分小区植糖 在冷凝后的平皿背面 , 用记号笔画出 6个均匀的植糖区域 (图1) , 用无菌镊子分别取代号为 A、B、C、D、E、F的 6种糖浸片各 1张对号放入用两种方法接菌的平板的对应区域中 , 并轻轻按压 , 以免在进行倒置培养时糖片脱离培养基平板。 培养及观察 将已放置糖浸片后的平皿置于37℃条件下 , 培养 18 ～ 24 h后 , 观察滤纸片周围有无菌落生长以及指示剂变色程度。 四、操作步骤 图 1　平板分区示意图 第八页