微生物基本操作规范样本.pdf

培养基制备 培养基概念： 是指以液体、半固体或固体形式，包括天然或合成成分，用于增进微 生物繁殖或保持其活力物质构成。由于各类微生物对营养规定不同， 培养目和检测需要不同，因而培养基种类诸多。咱们可依照某种原则， 将种类繁多培养基划分为若干类型。 培养基分类： 按功能分类：基本培养基、营养培养基、鉴别培养基、选取培养基、 特殊培养基。 按物理性状分类：液体培养基、固体培养基、半固体培养基。 液体培养基：所配制培养基是液态，这种培养基被用来微生物增菌和 生长状态观测。 固体培养基和半固体培养基：在液体培养基中加入适量凝固剂制成成 固体培养基和半固体培养基。惯用作凝固剂物质有琼脂。固体培养基 琼脂用量1.5-2%，半固体培养基琼脂用量在0.5～1%之间。固体培养 基用作微生物分离、鉴定、计数、保藏等。半固体培养基被用来观测 微生物动力和保藏菌种。 今天给人们展示一下各种培养基制备。 培养基制备基本过程： 调配成分、溶解、校正pH、分装、灭菌、质量检查和保存 所需物品：试剂、锥形瓶、天平、量筒、微波炉、高压蒸汽灭菌器、 玻璃试管、玻璃平板、接种工具。 （1）调配成分： 在锥形瓶或大容量烧瓶中依次加入蒸馏水200ml，1％蛋白胨，0.5％ NaCL，0.3％牛肉膏（g/v），精确称取各种成分，使其充分混合。 [注意事项] 培养基调配溶解： 先在锥形瓶底加入少量蒸馏水，再加入培养基成分，以防其粘在锥形 瓶底部烧结。制备培养基时，除玻璃容器时，还可用铝锅，搪瓷桶， 但不可用铁，铜等容器，以免铁和铜离子进入培养基（培养基中铁离 子含量超过0.14mg/L 时抑制细菌毒素产生，含铜量超过0.3mg/L 时 抑制细菌生长）。培养基中若需加入染料，胆盐，批示剂等，应在校 正pH后加入。 （2）溶解： 将配制好混合物微波炉加热8min，使其完全溶解，补足失水。 （3）校正PH： 不同细菌需要在含不同 pH 培养基上生长，普通将培养基 pH 调至 7.2～7.6。商品化试剂配制后可省略该环节，无需校正PH。依照所需 培养基用途不同分别加入不同含量琼脂，制成半固体培养基和固体培 养基。 （4）分装：（液体培养基、半固体培养基和某些固体培养基分装可在 灭菌钱也可在灭菌后） ①基本培养基：普通分装于容量为500ml锥形瓶灭菌后备用，以便 随时分装倾注平板或配制营养培养基等； ②琼脂斜面：普通在融化后分装于试管，量约为试管高度1/4~1/3， 灭菌后倾斜放置。 ③半固体培养基：分装量为试管容量1/4~1/3，灭菌后直立放置。 ④液体培养基：分装量为管长1/5，灭菌后直立放置。 （5）灭菌： 分装好培养基惯用高压蒸气灭菌，条件为103.43kPa，温度121℃ 15~20min；含糖培养基以68.95kPa，10~15min为宜，以免破坏糖类 物质；不耐高热物质配制成培养基，惯用流通蒸气灭菌或滤过除菌。 琼脂平板制备：先将灭菌琼脂融化后冷却至 50℃左右，以无菌操作 倾注于灭菌平皿内（内径 75mm 平皿约 8-9ml），水平旋转平皿，待 琼脂凝固后将平皿翻转，置4℃保存备用。 营养平板制备：先将灭菌琼脂融化后冷却至 50℃左右，以无菌操作 加入10%无菌脱纤维羊血（临用前置37℃水浴预温30min），轻轻摇 匀（避免产气愤泡），倾注于灭菌平皿内（内径75mm平皿约8-9ml）， 水平旋转平皿，待琼脂凝固后将平皿翻转，置4℃保存备用。 [注意事项] 平板浇注：倾注培养基时，切勿将皿盖所有启动，以免空气中尘埃及 细菌等微生物落入。倾注时若培养基温度过高，则冷凝水过多，易致 污染，不易分离到菌落；若温度过低，某些琼脂凝固，倾注平板表面 高低不平。可在无菌室或接种罩内倾注培养基后，将皿盖稍开一缝隙， 在紫外灯照射下待凝，这样利于蒸气散发，减少平板内冷凝水。倾注 血液琼脂时，由于加血时琼脂表面容易产气愤泡，倾注时适时转动锥 形瓶，使气泡附于瓶壁，以减少血平板表面气泡。 （6）质量检查： 需做无菌实验和效果实验。 ①无菌实验：将灭菌后培养基置37℃孵育24h，无任何微生物生长 为合格。 ②效果实验：将已知原则参照菌株接种于待检培养基中，检查细菌 生长繁殖状况和生化反映与否与预期成果相符和。 （7）保存： 通过质量检查合格培养基注明名称，制作日期存储于冷暗处或4℃冰 箱（固体培养基应将平皿底朝上，盖朝下或用保鲜袋包裹，以减少水 分蒸发，液体培养基应直立放置，以免污染）。