自身免疫病与自身抗体的检测.ppt

自身抗体的检测方法 斑点型（S）：抗SSA、抗SSB？ 第三十一页，共72页。 自身抗体的检测方法 着丝点型（ACA）：抗着丝点抗体。 第三十二页，共72页。 自身抗体的检测方法 抗纺锤体抗体 第三十三页，共72页。 自身抗体的检测方法 ELISA法检测ANA [原理]：利用ELISA法，搜集细胞核和细胞浆抗原，如ds-DNA、Histones、Sm、RNP、SSA、SSB、Scl-70、centromere、Jo-1等混合液包被微孔板，检测抗核抗体。 第三十四页，共72页。 自身抗体的检测方法 ELISA法与IIF法比较，有操作简便，结果判断较客观，无需荧光显微镜等优点，现在一些医院用ELISA法来作检测ANA的筛选方法。 第三十五页，共72页。 自身抗体的检测方法 颗粒凝集法(PA） [原理]：以检测抗脱氧核糖核蛋白体（抗DNP抗体）为例。从小牛胸腺中提取脱氧核糖核蛋白(DNP）抗原，致敏聚苯乙烯乳胶，制成抗DNP抗体乳胶凝集试剂，当血清中存在抗DNP抗体时，便与乳胶颗粒上的DNP抗原结合，使乳胶颗粒相互凝集出现肉眼可见的凝集颗粒。 第三十六页，共72页。 自身抗体的检测方法 金标免疫斑点法 [原理]：斑点反应板上固相纯化抗原与血清中抗体形成复合物，胶体金标记抗人IgG单抗与复合物结合，形成肉眼可见的红色圆斑点。本法用于快速检测血清中抗体。 第三十七页，共72页。 自身抗体的检测方法 免疫印迹法(IB）： [原理]：用SOS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，将抗原按分子量大小予以分离，再将其转移至硝酸纤维薄膜，如果受检血清含有相应抗原的自身抗体，则在相应位置会发生免疫反应，再加酶标抗体，底物，显色液和终止液，在抗原抗体反应的位置出现显色带，与标准带相比较。 第三十八页，共72页。 自身抗体的检测方法 免疫印迹法(IB）： 第三十九页，共72页。 自身免疫病常规实验室检查 血常规： RA：80%贫血，活动期PLT升高。 SLE：WBC，PLT，Hb均可能降底。 免疫血管炎：WBC增高。 对药物引起的骨髓抑制的监测。 第四十页，共72页。 自身免疫病常规实验室检查 尿常规： SLE：尿蛋白及RBC的出现表明肾脏损伤。 第四十一页，共72页。 自身免疫病常规实验室检查 肝功能：如有异常，应鉴别是何种性质（自身免疫肝病？） 病原感染常规检查 肝炎病毒：HAV、HBV、HCV、HDV、HEV、HGV…… EBV,TB…… 第四十二页，共72页。 自身免疫病常规实验室检查 肾功能：免疫肾病（SLE？血管炎？） 肌酶：多发性肌炎/皮肌炎（PM/DM） 尿酸：痛风？ 第四十三页，共72页。 自身免疫病常规实验室检查 免疫血清学检查 免疫球蛋白、血清蛋白电泳（高球蛋的血症）。 ESR、CRP（急性期蛋白）：对病情活动性的判断。 CH50、C3、C4：SLE活动期均降底。 ASO：链球菌感染，风湿热。 第四十四页，共72页。 自身免疫病常规实验室检查 抗核抗体谱（ANAs） 抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCAs） 类风湿关节炎相关抗体 自身免疫性肝病相关抗体 抗磷脂抗体 其它…… 第四十五页，共72页。 抗核抗体谱(ANAS）的检测 抗核抗体(ANA）是自身抗体中的一组抗体。ANA的研究，从发现狼疮(LE）细胞算起，迄今40多年来，人们对ANA的认识不断加深，已衍生出具有不同临床意义的二十余种ANA，形成了抗核抗体谱(ANAS）。 第四十六页，共72页。 抗核抗体谱(ANAS）的检测 抗核抗体： 传统定义：顾名思义是指抗细胞核抗原成分的自身抗体的总称。 现代定义：是指抗细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。 第四十七页，共72页。 抗核抗体谱(ANAS）的检测 ANA检测—IIF法(金标准) 1、90%以上实验室使用Hep-2细胞为底物; 2、为人来源培养细胞（人喉癌细胞），据有核大、细胞结构清晰特点； 3、便于结构观察及荧光染色核型分析； 4、 核抗原丰富、特异性强、有完整的ANA抗原谱(细胞核、浆、骨架、周期）； 5、可预测分析ANA靶抗原范围； 6、 经验性强。 第四十八页，共72页。 第四十九页，共72页。 IIF法检测ANA阳性常见荧光染色模型 细胞核 细胞浆 细胞骨架 细胞周期 均质型 核糖体型 肌动蛋白型 中心体型 核膜型 线粒体型 波形蛋白型 纺锤体型 斑点型 高尔基体 中间体型 核仁型 溶