段旭昌免疫磁珠分离技术(IMB)及在食品生产中的应用.pptxVIP

免疫磁珠分离技术（IMB）及在食品生产中的应用 段旭昌 副教授西北农林科技大学食品科学与工程学院 2013 9 10提 纲磁性微球磁性微球结构、分类及特点磁性微球的制备磁性微球分离技术免疫磁株免疫磁珠结构与性质免疫磁株的特点免疫磁珠的分类免疫磁珠的制备免疫磁珠分离技术免疫磁珠技术的应用免疫磁珠在食品安全检测中的应用免疫磁珠与其它检测手段的联用免疫磁珠技术在其他领域的应用免疫磁珠技术的优缺点及发展望一 磁性微球是通过一定方法将磁性无机粒子与有机高分子结合形成的具有一定磁性及特殊结构的体积在几纳米到几十微米之间的复合微球。高分子磁性微球表面具有众多表面功能基 团，同时具有磁响应性，在外加磁场作用下具有磁导向功能。目前已广泛用于生物医学、细胞学和分离工程等领域。二 磁性微球结构、分类及特点磁性核材料多为Fe、Co、 Pt 、Ni等金属及其氧化物。如Fe3O4、γ- Fe2O3、Me Fe2O3（Me= Co、Mn、Ni）、 BaFe12O19、铁钴合金（Fe-Co和Ni-Fe）。最常用的是Fe、 Fe2O3、 Fe3O4。其中Fe3O4 应用最多。构成磁性微球的高分子材料有天然高分子和合成高分子物质。天然高分子有明胶、球蛋白、牛血清白蛋白、聚赖氨酸、淀粉和多种聚糖如纤维素、葡聚糖、琼脂糖、壳聚糖、果胶等。合成高分子材料有聚苯乙烯、聚乙烯亚胺、聚乙烯醇、聚丙烯酸（酯）及其共聚物、聚酰胺类、聚苯胺及硅烷等。这些材料可单独用，也可复合使用。磁性微球表面可根据需要赋予不同的功能基 团(如－OH、－COOH、－CHO、－NH2,—SH、—CONO2、—CONH2、—SO3H、—SiH3、—环氧基、—CHCl等)，使其表现具有疏水-亲水、非极性-极性、带正电荷-带负电荷等不同物理性质。同时具有磁响应性，在外磁场作用下具有磁导向性。 导电聚合磁微球 聚合磁微球 对磁性微球的要求：粒径均匀、大小合适、比表面积大、吸附力强、具有强的超顺磁性、悬浮均匀稳定性好、不易聚集沉淀、表面具有多种活性基团、理化性质稳定、具有较好生物相容性、对细胞、机体、活性物质损伤小。 由于环氧基、氯甲基功能基团非常活跃，不需连接其他活性基团即可与生物配基（如抗体、抗原等）偶联，及其他基团的微型磁珠在生物学、医学方面应用较为广泛。三 磁性微球的制备 磁性微球制备方法：共沉淀法、悬浮聚合法、乳液聚合法、分散聚合法、包埋法及原子转移自由基聚合法等。1.共沉淀法 金属离子在碱性条件下与高分子共沉淀，一步反应生成磁性高分子微球的方法。2Fe3++ Fe2++8OH→Fe3O4+4H2O Pich[等先通过单体聚合反应得到PS-AAEM颗粒分散剂，再把配制好的Fe3+、Fe2+溶液加入聚苯乙烯（PS）-乙酰乙酸基甲基丙烯酸乙酯（AAEM）颗粒的分散剂中，然后滴加NH3·H2O。Fe3O4 粒子在PS-AAEM 表面沉积，制得PS-AAEM为核心、Fe3O4 粒子为壳层的磁性微球。微球的磁性能通过改变FeCl2 和FeCl3 的浓度或改变PS-AAEM 核心的尺寸来控制。Xia 等把一定配比的FeCl2、FeCl3 与葡聚糖（dextran T-10）共混，然后滴加NH3·H2O，在超声连续作用下水浴加热，制得以Fe3O4 为核、dextran 为壳的磁性微球。杨玉东等把一定配比的FeCl3·6H2O、FeCl2·6H2O与配体（如二亚乙基三胺五乙酸（DTPA）或乙二氨四乙酸（EDTA）等）组成的混合液体加入到75℃的葡聚糖T-10 溶液中，并快速滴加NH3·H2O，制备了葡聚糖为壳、氧化铁为核的磁性微球。2聚合法制备磁性微球过程异相聚合法包括分散聚合、乳液聚合、悬浮液聚合三种。该法是将磁性粒子用表面改性剂、偶联剂、引发剂等处理后分散到含有聚合物单体的溶剂中进行聚合反应。通常以磁性粒子为活性中心进行单体聚合。四 磁性微球分离技术MACS(Magnetic Activated Cell Sorting) 是将免疫学+细胞生物学+磁力学结合为一体，利用磁性微球表面功能基团的专一亲和特性或多孔吸附特性吸附特定组分，然后用外力磁场作用将吸附了特定物质的磁珠加以分离，再经过洗脱磁珠上吸附的目标物质的一种新型分离技术，具有广泛的用途。 几种 DNA 分离方法的比较Comparation of several DNA extraction methods方法?传统法鳌合树脂法玻璃粉法磁珠法免疫亲和法DNA 提取酚 / 氯仿等溶剂抽提Chelex 100 树脂吸附玻璃粉吸附离心分离磁珠吸附磁场分离抗原抗体反应磁场分离适用范围大多数标本 DNA 提取纯化培养及各种临床标本土壤标本冰冻、陈旧组织冰冻、陈旧组织，样本含量很少的标本方法评价DNA 纯度高、含量多，但较费时，步骤繁琐，用有机溶剂，有损操作者