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解磷解钾微生物的筛选与初步鉴定
微生物是土壤肥力的核心,土壤中的微生物不仅数量巨大,而且种类极多。
许多微生物对土壤氮、磷和钾等养分的转化和供给起非常重要的作用。氮、 磷和
钾均是作物生长发育必需的大量元素。 根瘤菌可以与豆科植物共生固氮 , 在生物
固氮中占有重要的地位。溶磷菌、硅酸盐细菌 (又名钾细菌 )能够分解土壤中的固
定态磷、固定态钾转化为作物可以直接吸收利用的有效磷、有效钾。因此,高效
的解磷、解钾菌株对于提高土壤肥力具有非常重要的作用。
一、实验目的
1、从各类土样中筛选高效的解磷解钾菌株
2、熟悉菌株筛选、分离纯化、鉴定等具体操作流程
二、实验原理
分别配制以磷酸钙、钾长石为唯一磷源或钾源的筛选培养基, 在该培养基
上,只有能分解利用磷酸钙、钾长石的菌株才能够生长。因为磷酸钙、钾长石
不能溶解于培养基,故在固体培养基平板上表现为浑浊,若菌株能够利用磷酸
钙、钾长石,则在培养基中形成以菌落为中心的透明圈,因此可以通过是否产
生透明圈来筛选目的菌株。
分别筛选细菌和真菌。为筛选到真菌, 采用在培养基中加入链霉素方法来
抑制细菌生长。
三、材料和方法
1、材料
各处取得的土样;
培养基种类如下( g/l ):
(1)牛肉膏蛋白胨培养基:
(2)解磷菌株筛选培养基:
无机磷固体培养基: 葡萄糖 l0 g,(NH4)
2SO4 g,酵母粉 g,MgSO4 7H·2O g,
氯化钠 ,氯化钾 g,FeSO
4 7H· 2O g,MnSO4 7H· 2O g,Ca3(PO4)2 2 g,琼脂粉 18
g,蒸馏水 1000 mL,pH ,ll5 ℃灭菌 20 min 。
(3)钾长石固体培养基:
蔗糖 5 g,葡萄糖 5 g,(NH4)
2SO4 g,酵母粉 g,MgSO4 7H·2O g,磷酸
氢二钠 2 g,FeSO
4 7H· 2O 0.03 g,MnSO4 7H·2 O 0.03 g,钾长石 2 g,琼脂粉 18 g,
蒸馏水 1000 mL,pH ,ll5 ℃灭菌 20 min 。
2 、方法
(1) 筛选:
1、配制 %的生理盐水,灭菌备用。
2 、取 5 g 采集的土样溶解到 45ml %的生理盐水中, 37 度。摇床摇 30 min 左右,
-2 -4
定为原液。制作浓度梯度 10 、10 稀释度,分别取原液、 -2、-4 各 100 μl 分别
涂布于解磷、解钾筛选及牛肉膏蛋白胨培养基平板上, 28℃倒置培养,牛 2 天,
筛选 3 天。观察菌落生长,透明圈产生情况。牛肉膏蛋白胨培养基菌落计数,计
算 菌数/g 土壤。
(2)菌落挑取与纯化并保存:
用接种环挑取较大透明圈的单菌落至筛选培养基平板, 划线分离单菌落。 培
养后观察是否为纯菌, 菌落形态一致, 且验证是否有透明圈后挑取单菌落至解磷
或解钾培养基斜面中培养至长好。 若不纯则分别挑取形态不同的菌落分别在筛选
平板划线,确定透明圈,重复挑取和纯化步骤。挑取至斜面培养基中培养后,将
斜面 4 度冰箱保存。
(3)菌株复筛
将有透明圈的解磷、 解钾菌株各自从斜面上用接种环挑取一环, 小心点种在
筛选培养基上,每个平板点四个不同菌落,注意不要相互污染。
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