反相高效液相色谱法测定食用植物油中维生素E的含量.docVIP

反相高效液相色谱法测定食用植物油中维生素E的含量 摘要: ，高效液相色谱法、δ-生育酚、γ-生育酚、α-生育酚 关键词:维生素E 第一章 绪论 1 选题的目的和意义 维生素E是具有α-生育酚生物活性的生育酚和三烯生育酚及其衍生物的总称。它们都是苯并二氢吡喃的衍生物。 2 高效液相色谱法简介 3 国内外研究进展 4 主要研究内容 第二章 高效液相色谱法色谱条件的优化 引 言 由于维生素E结构复杂，异构体种类多，分析测定相对困难，现已知的分析方法有气相色谱法、紫外分光光度计法、电化学分析法、比色法、荧光法、 。前面几种方法大都需要较复杂的样品前处理过程，增加了试高效液相色谱法等 验难度，而且测定的结果受到多种因素的影响。高效液相色谱法是近年来发展起来的一种分析技术，用来分析维生素E能简化样品处理的步骤，相较其他方法具有色谱柱温度条件相对温和，物质组分分离速度快，灵敏度高，重复性好，干扰小等优点，明显优于其他几种检测方法，成为实际检验工作中测定VE最普遍的方法。 高效液相色谱法又分为正相色谱法及反相色谱法。正相色谱法的流动相大多为有毒有害的且易挥发的有机溶剂，故一般采用反相色谱柱进行分析。反相键合相色谱是在ODS(C)柱上，采用甲醇-水或者乙腈-水作流动相，分离非18 极性或中等极性的化合物如同系物，稠环芳烃、药物、急速、天然产物及农药残 [1]留量等。色谱柱的稳定性比较高，保留时间短，重现性好，容易平衡等优点，而且一般以水和甲醇作为流动相，减少了有毒有害溶剂的使用。在高效液相色谱中，影响分离效果的好坏的其中一个重要指标是色谱填料的选择，反相色谱用的填料通常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反相色谱所使用的流动性极性较强，通常为水、缓冲溶液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反相填料由:C (ODS),C(MOS),C(Butyl)、CH188465(Phenyl)等。本试验选用的是C色谱柱。紫外吸收检测器是一种选择性的浓18 度型检测器，是HPLC中应用最早、最广泛的检测器之一，原理是通过测定物质在流动池中吸收紫外光的大小确定其含量，优点是不仅灵敏度高和选择性高，而且对环境温度、流动相的流速波动和组成变化不敏感。试验时选用的紫外检测器。 目前有相关标准及文献介绍了VE的测定方法，但是色谱条件各不一样本试验根据以下相关标准及文献的色谱条件选取合适的水平进行试验分析，对波长、流动相比例、柱温、流速做单因素实验从而选取每个因素的三个最佳水平进行试验设计。分离度为色谱柱的总分离效能指标，既反映柱效率又能反映选择性，其定义为相邻两组分的色谱峰保留值之差与峰底宽总和一半的比值。本试验测定维生素E的三种单体，观察色谱图可知，三种单体的色谱峰都能完全分离，峰 形尖细，故以色谱峰的保留时间来定性峰面积来定量，选用第一个色谱峰出峰时间及VE三种单体色谱峰的峰面积作为评定值，以确定测定维生素E的最佳色谱条件即第一个单体保留时间最短，峰面积响应值最大。初始色谱条件为:紫外检测波长300nm，流动相为甲醇+水=98+2，流速1.0ml/min，柱温30?，进样量10ul。相关标准及文献VE测定色谱条件比较如表1所示。 表1 色谱条件比较 标准及文献 紫外检测器波长 流动相比例 柱温 流速 NY/T 1598-2008 300nm 甲醇+水=98+2 30? 未规定 GB/T 5009.82-2003 300nm 甲醇+水=98+2 未规定 1.7ml/min GB/T 17812-2008 280nm 甲醇+水=95+5 室温 1.0ml/min GB/T 9695.30-2008 292nm 甲醇 30? 1.0ml/min GB/T 5413.9-2010 294nm 甲醇 35??1? 1.0ml/min [2]文献2 荧光检测器 甲醇+水=98+2 35? 1.0ml/min [3]文献3 292nm 甲醇+水=98+2 40? 1.0ml/min [4]文献4 298nm 甲醇+水=99+1 25? 1.7ml/min [5]文献5 荧光检测器 甲醇+水=98+2 室温 0.8ml/min 1 材料与方法 1.1 材料与仪器 1.1.1 化学试剂 甲醇 高效液相色谱淋洗剂HPLC 国药集团化学试剂有限公司 乙醇(无水乙醇) 优级纯 国药集团化学试剂有限公司 无水乙醚 分析纯 衡阳市凯信化工试剂有限公司 硝酸银 分析纯 国药集团化学试剂有限公司 碘化钾 分析纯 国药集团化学试剂有限公司 氢氧化钠 分析纯 国药集团化学试剂有限公司 硫代硫酸钠 分析纯 国药集团化学试剂有限公司 氨水 分析纯 衡阳市凯信化工试剂有限