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人乳牙牙髓基质干细胞的研究进展 人乳牙牙髓基质干细胞的研究进展 【摘要】 人乳牙牙髓基质干细胞（SHED）的研究刚刚处于起步阶段，但其本身具有的多向分化潜能有着非常重要的研究价值。本文通过参考相关文献，结合诸多学者的研究成果，从人乳牙牙髓基质干细胞的研究基础、体外实验方法及牙髓基质干细胞生物学特性等方面对人乳牙牙髓基质干细胞的研究进展进行综述。 【关键词】 人乳牙牙髓基质干细胞；生物学特性 牙髓干细胞（DPSCs）是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞，因其可特异性的分化牙体矿化结构等特性而越来越受到广泛的关注。以往对牙髓干细胞的研究通常取成人正常阻生的第三磨牙的牙髓进行分离、培养及鉴定，而对人乳牙牙髓基质干细胞（SHED）的各项生物学特性研究甚少。 1.1 骨髓基质干细胞（BMSCs）的研究 骨髓基质干细胞是最早发现并成为研究最为广泛的成体干细胞，早在1968年，Friedenstein［1］就从小鼠骨髓中分离出具有塑料粘附性，细胞形态类似成纤维细胞的克隆单位（CFu-Fs），然后将这种克隆单位移至肾筋膜下的开放系统中，发现有类骨质形成，但是由于当时并不知道CFu-Fs中含有BMSCs，直到1998年，Krebsbach等［2］尝试用BMSCs治疗颅面部缺损时，BMSCs的临床应用研究才真正开始，接下来，BMSCs多向分化能力的研究更为广泛，它不仅能向成骨细胞、软骨细胞分化，还可以向肌细胞、脂肪细胞、神经细胞分化。目前，骨髓基质干细胞（BMSCs）的研究已较为成功。 1.2 牙髓基质干细胞（DPSCs）的研究 2000年，Gronthos等［3］借鉴已确认的骨髓基质干细胞BMSCs的研究方法，通过与其进行对比研究，第一次报道从成体牙髓组织中体外培养，获得集落状生长的、体外可诱导分化形成成牙本质样结构的细胞，提出了牙髓干细胞（DPSCs）的概念。各项研究表明，DPSCs和BMSCs有很多相似之处，均表达与内皮、平滑肌、骨以及成纤维细胞有关的表面分子标记，Shi等［4］还应用基因芯片技术分析研究了DPSCs和BMSCs的基因表达情况，得出了DPSCs和BMSCs在人类的4000多个基因表达水平上一致的结论。目前，对DPSCs的研究尚在进行中。 1.3 人乳牙牙髓基质干细胞（SHED）的研究 目前国内外通用的是从人健康的第三磨牙中提取牙髓干细胞，2021年，Miura［5］从脱落乳牙的牙髓中分离出具有多向分化能力的干细胞，将其命名为SHED，认为脱落乳牙的牙髓是牙髓干细胞的又一理想来源。SHED体外培养时表现的性质与DPSCs有一定的相似性，体外经诱导培养可分化为神经样细胞、脂肪细胞、成牙本质细胞［6］。这个概念的提出，是对从前所谓牙髓“前体细胞”性质的进一步认识，为成体干细胞的研究增添了新的内容，并使牙齿组织工程研究有了突破性的进展。 2 人乳牙牙髓基质干细胞的取材、分离、培养及鉴定方法 人乳牙牙髓基质干细胞的取材虽简单却局限，有学者报道［5］，将脱落的乳牙置牛奶瓶中冷冻过夜，从冠和根取出牙髓组织。也有学者从临床上拔出的松动的乳牙的牙髓中获取牙髓组织，但是由于此时牙根已吸收，因此获取的大多是冠髓。2021年刘少华等对人根髓、冠髓细胞进行培养，发现培养 的根髓细胞比冠髓细胞具有较高的成功率和贴壁率，较强的细胞活性，在形态上根髓细胞比冠髓细胞更具原始性，功能上根髓比冠髓更易诱导矿化，由此推测牙髓干细胞可能存在于全部牙髓中，但在根髓中的密度要比冠髓中高。目前，人乳牙牙髓干细胞的分离培养方法主要有贴壁法、酶消化法、限稀释法、梯度离心法和免疫选择法。 关于人乳牙牙髓基质干细胞的鉴定方法，最有效的是利用细胞表面的相对特异性分子标记，从而对其进行识别、分离和纯化，但目前对人乳牙牙髓干细胞的特异性标记尚未清楚，因此对其鉴定面临着巨大的困难。 3 牙髓基质干细胞的生物学特性 牙髓基质干细胞存在着分化层次［7］,即牙髓干细胞群中包含着增生能力不同的细胞亚群，其中部分趋向于易分化，部分趋向于自我更新。因此，牙髓基质干细胞具备多向分化的潜能和自我更新的生物学特性。 3.1 多向分化的潜能 3.1.1 成牙本质细胞 Couble等［8］对发育早期的牙髓进行体外培养，发现可分化形成牙本质细胞，并出现矿化结节，在实验中加入β-甘油磷酸钠诱导分化后，牙髓细胞出现极化，形成突起，突起排列成一个方向，并且相互之间形成连接复合体，胞体内形成牙本质结构具有的典型细胞器，而后出现矿化，X线显微分析表明有钙、磷的沉积，电子衍射证明矿化中晶体结构的存在，从而证明牙髓基质干细胞有分化为成为细胞的潜能。林云峰等对人