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人凝血因子效价检验标准操作规程 人凝血因子Ⅷ效价检验标准操作规程 1 目的 严格规范操作者的检测方法，使操作者能够快速有效和安全准确地完成检验操作，特制定本操作规程。 2 适用范围 本操作规程适用于冷沉淀、人凝血因子Ⅷ洗脱原液、原液、半成品、冻干及成品等含有人凝血因子Ⅷ的供试品效价检测。 3 制定依据 《中华人民共和国药典》（2021年版）三部，附录3521人凝血因子Ⅷ效价测定法（一期法）。 4 职责 4.1 检验人员按本SOP对供试品进行检验和计算。 4.2 复核人对检验中的计算进行复核。 4.3 确认人按本SOP对检验过程及结果进行相应确认和判定。 5 仪器及器具 5.1 仪器 5.1.1 凝血仪 5.1.2 电子天平 5.1.3 电子分析天平 5.1.4 漩涡混匀器 5.2 器具 5.2.1 微量移液器 5.2.2 吸头 5.2.3 移液管 5.2.4 洗耳球 5.2.5 试管 5.2.6 试管架 5.2.7 砂轮 5.2.8 凝血仪耗材（比色盘、供试品杯等） 6 试剂及试液 6.1 试剂 6.1.1 人凝血因子VIII国家标准品 6.1.2 人凝血因子VIII比较品 6.2 试液 6.2.1 人凝血因子Ⅷ缺乏血浆 6.2.2 稀释液（咪唑稀释液/因子稀释液/样本稀释液） 6.2.3 激活的部分促凝血酶原激酶时间试剂 6.2.4 氯化钙溶液 7 操作步骤 7.1 供试品溶液、比较品溶液及标准品溶液的制备 7.1.1 供试品及比较品溶液的制备 7.1.1.1 供试品及比较品的预稀释 用人凝血因子Ⅷ缺乏血浆将供试品预稀释成约1IU/ml（冻干制品 先按标示量加入水溶解；冷沉淀先取1~2g，加水溶解约为20倍。具体稀释过程如下： 人凝血因子人凝血因子Ⅷ 供试品区分 冷沉淀 Ⅷ洗脱原半成品、成品、冻干液、原液 及比较品 供试品 1~2g 100μl 100μl 人凝血因子Ⅷ缺乏血浆 19~38g纯化水 300μl 100μl 稀释倍数 20 4 2 取上步稀释液 --- 50μl 50μl 人凝血因子Ⅷ缺乏血浆 --- 450μl 450μl 总预稀释倍数 20 40 20 7.1.1.2 供试品预稀释液的工作稀释（供试品溶液） 将上述含人凝血因子Ⅷ约1IU/ml的供试品预稀释液用稀释液稀释6倍、8倍、10倍。具体稀释过程如下： 先取500μl已预稀释成含人凝血因子Ⅷ约1IU/ml的供试品预稀释液，加500μl稀释液，稀释成含人凝血因子Ⅷ约0.5IU/ml，混匀，再分别从中取200μl移到3支试管中，分别加400μl，600μl和800μl稀释液。供试品稀释可根据本身效价高低及仪器环境等变化作适当适当调整。 如下表稀释： 供试品预稀释液 稀释液 稀释倍数 取上步稀释液 稀释液 总稀释倍数 供试品溶液1 500μl 500μl 2 200μl 400μl 30 供试品溶液2 500μl 500μl 2 200μl 600μl 40 供试品溶液3 500μl 500μl 2 200μl 800μl 50 7.1.2 标准品溶液的制备 7.1.2.1 预稀释：将标准品按标示量加入水溶解，取100μl复溶品，加人凝 血因子Ⅷ缺乏血浆适量预稀释成约1IU/ml。 7.1.2.2 工作稀释：将上述1IU/ml的标准品用稀释液稀释2倍、4倍、8倍、 16倍、32倍。 稀释倍数 ―― 稀释液 ×2 600μl 1IU/ml 标准品 600μl ×4 600μl ×2 标准品 600μl ×8 600μl ×4 标准品 600μl ×16 600μl ×8 标准品 600μl ×32 600μl ×16 标准品 600μl 人凝血因子Ⅷ效价 0.5 IU/ml 0.25 IU/ml 0.125 IU/ml 0.0625 IU/ml 0.03125 IU/ml 7.2 检验操作 7.2.1 凝血仪准备： 7.2.1.1 先打开凝血仪电源，在反应盘上放入比色盘，预热使反应仓温度 达到37℃。 7.2.1.2 分别将激活的部分促凝血酶原激酶时间试剂和氯化钙溶液加入 凝血仪的相应区域。 7.2.2 上机测试凝固时间 7.2.2.1 将供试品杯加到供试品盘上，并按要求在相应的供试品杯中加入 供试液（标准品、比较品和供试品稀释液）和相应试剂。具体加入位置如下： Dil杯加入稀释液； 18号杯加入人凝血因子Ⅷ缺乏血浆； 1~14号杯加入待测液； 7.2.2.2 按仪器操作规程