沙拉沙星sar含量elisa检测试剂盒农药残留.docVIP

沙拉沙星（ SAR ）含量 ELISA 检测试剂盒（农药残留） 96T 请客户正式实验前做预实验确定样本稀释倍数！ 实验原理： 本试剂盒应用间接竞争法测定标本中沙拉沙星（ SAR ）水平。用纯化的沙拉沙星 （SAR ）标准品包被微孔板，制成固相抗原。样品中沙拉沙星与固相抗原竞争抗体，再利用 HRP 标记的二抗催化底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用 下转化成最终的黄色。 颜色的深浅和样品中的沙拉沙星 （SAR ）呈负相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值），通过标准曲线计算样品中沙拉沙星（ SAR）浓度。 实验目的： 测定组织、血清、血浆及相关液体样本中沙拉沙星（ 本试剂盒检测范围： 0.16-2.56 ug/mL  SAR ）含量。 样本处理及要求： 血清：血液室温自然凝固 90 分钟，离心 10 分钟（ 3000 转 /分），收集上清，保存过程中 如出现沉淀，应再次离心。将上清液用氮气吹干， 20 μL0.03M NaOH 复溶。实验时， 用 dilution buffer 稀释复溶后的样品。 2. 血浆： 应根据标本的要求选择 EDTA 、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后， 离心 10 分钟（ 3000 转 /分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 将上清液用氮气吹干， 20 μL 0.03M NaOH 复溶。实验时，用 dilution buffer 稀释复溶后的样品。 尿液：用无菌管收集，离心10 分钟（ 3000 转 /分），收集上清。保存过程中如有沉淀形 成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。将上清液用氮气吹干， 20 μL 0.03M NaOH 复溶，实验时，用 dilution buffer 稀释复溶后的样品。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 10 分钟（ 3000 转/ 分）。仔 细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS（PH7.2-7.4 ）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100 万 /ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右 （ 2000-3000 转 /分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。将上清 液用氮气吹干， 20 μL 0.03M NaOH 复溶。实验时，用 dilution buffer 稀释复溶后的样品。 组织标本：称取组织 1g，加入 1mL PH7.4 的 PBS，充分研磨。 3000 转 /分，离心 10 分 钟，收集上清。 将上清液用氮气吹干， 20 μL 0.03M NaOH 复溶。实验时，用 dilution buffer 稀释复溶后的样品。 操作步骤： 标准品的稀释与加样：用 0.03M NaOH 配制 5mg/mL 的标准品母液，根据实验使用量用试剂盒中 dilution buffer 将母液稀释 1000 倍成 5 μg/mL （先稀释 100 倍，再稀释 10 倍）， 并将其稀释到 2.56 ug/mL 。设置浓度分别为 2.56 ug/mL ，1.28 ug/mL ，0.64 ug/mL ，0.32 ug/mL ， 0.16 ug/mL 的标准曲线。 取五支 EP 管，加入 200  标准曲线每个浓度设置两个重复， 浓度稀释采用倍比稀释法， 分别 μL dilution buffer ，取 200 μL 2.56 ug/mL 的标准品至第一管混匀成 1.28 ug/mL  标准液，再从其中取出  200 μL  至第二管混匀成  0.64 ug/mL  标准液，以此类推， 得到  6 个浓度梯度的标准液。 样品与抗体预结合：用 0.1%OVA 将抗体稀释 20000 倍，分别设标准孔、待测样品孔、空白孔、对照孔。 标准孔： 分别取 130 μL 上述 6 个浓度梯度的标准液与等体积稀释后的抗体混合。 待测样品孔： 130 μL 样品与等体积稀释后的抗体混合。 空白孔： 取 260 μL dilution buffer 。 对照孔： 取 130 μL dilution buffer 与等体积稀释后的抗体混合。 将上述各管室温摇床温育 40 分钟。 3. 温育：将上述各管混匀后每孔加入 100 μL ，用封板膜封板后置 37 ℃温育 90 min。 洗涤：将 50 倍浓缩洗涤液 washing buffer 用蒸馏水 50 倍稀释后备用，弃酶标板中液 体，吸水纸上拍干，每孔加入 300 μL 洗涤液，停留 1 min ，弃液体，拍干。重复 4 次。 5. 加酶标二抗： 400 倍稀释二抗， 每孔加入 100 μL ，用封板膜封板后 3