(病原生物与免疫学实验)免疫实验二：沉淀反应与溶血试验.pptVIP

(病原生物与免疫学实验)免疫实验二：沉淀反响与溶血试验-陈玮琳、翁莉霞 实验二 〔一〕沉淀反响 1、单向琼脂扩散试验〔示教〕 2、双向琼脂扩散试验 3、对流免疫电泳试验 〔二〕补体参与的免疫反响 1、溶血反响 2、补体结合试验〔原理〕 一定条件 Ag、Ab比例适宜 〔一〕 沉淀反响 可溶性Ag + Ab 沉淀物 沉淀反响可在溶液中进行，也可在琼脂等凝胶中进行 1、单向琼脂扩散试验 〔定量〕 2、双向琼脂扩散试验 〔定性或半定量〕 Ag Ab Ab ？ Ag Ab ？ Ag Ab ？ Ag ：标本中无Ag ：标本中有Ag 〔相同抗原?〕 〔在Ag、Ab比例适宜处形成沉淀线〕 标本 阳性对照 Ab ？ Ag Ab ？ Ag Ab ？ Ag ：标本中无Ag ：标本中有Ag 〔相同抗原〕 标本 阳性对照 2、双向琼脂扩散试验〔定性〕 〔请按照实验指导讲义方法进行操作〕 Ab Ag Ag ? ? ? ? Ab ？ Ag 1. Make a agar plate (without Ab or Ag) 2. Punch wells Add samples: Anti-AFP positive control (AFP) Test sample (AFP?) Ab Ag ？ Ab ？ Ag Ab ？ Ag ：no Ag(AFP) in sample serum ：same Ag(AFP) in sample serum Result (1): 4. incubation and observe results ：no Ag(AFP) in sample serum ：same Ag(AFP) in sample serum Ab Ag Ag Ag Ag ? ? ? ? Ab Result (2): sample serum (AFP?) AFP, (positive control) Anti-AFP Ab Ag Ag ? ? ? ? sample serum (AFP?) Anti-AFP Result (3): Ab ？ Ag AFP, (positive control) 明天下午看结果， 3、对流免疫电泳 原理图： Ab Ag ＋ － pH 8.6 电泳力： 电渗力： 合力： 运动方向： 14 对流免疫电泳检测方法： Ab 阳性对照〔Ag〕 待测标本〔？Ag〕 〔有沉淀线：有Ag； 无沉淀线：无Ag〕 ？ ＋ － 对流免疫电泳检测方法〔加样图〕： Ab〔抗AFP〕 阳性对照〔Ag〕 〔阳性血清，含AFP〕 待测标本〔？Ag，？AFP〕 〔有沉淀线：有Ag，AFP； 无沉淀线：无Ag，无AFP〕 ？ ＋ － 〔二〕补体参与的免疫反响 1、溶血反响 补体 SRBC + Ab SRBC-Ab 溶血 〔溶血素〕 请按照实验指导讲义方法进行操作 2人/组 注意观察溶血现象 请分析：为何第3、4管不溶血，分别缺什么成分？ 2、补体结合试验〔检测原理〕 ？ 补体 Ab ？ Ab 补体 反响系统〔待测系统〕 指示系统 溶血素 溶血素 SRBC SRBC 有Ag 无Ag 不溶血 溶血 〔标本中有 Ag〕 〔标本中无 Ag〕