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环境生物学实验报告 荧光显微镜 荧光显微镜是以紫外线为光源， 用以照射被检物体， 使之发出荧光， 然后 在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸 收、运输、化学物质的分布及定位等。 细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线 照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体 染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研 究的工具之一。 现在多采用 200W的超高压汞灯作光源，它是用石英玻璃制作，中间呈球形， 内充一定数量的汞，工作时由两个电极间放电，引起水银蒸发，球内气压迅速升 高，当水银完全蒸发时，可达 50～70 个标准大气压力，这一过程一般约需 5～ 15min。超高压汞灯的发光是电极间放电使水银分子不断解离和还原过程中发射光 量子的结果。它发射很强的紫外和蓝紫光，足以激发各类荧光物质，因此，为荧光 显微镜普遍采用。 超高压汞灯也散发大量热能。因此，灯室必须有良好的散热条件，工作环境 温度不宜太高。 新型超高压汞灯在使用初期不需高电压即可引燃，使用一些时间后，则需要 高压启动（约为 15000V），启动后，维持工作电压一般为 50～60V，工作电流约 4A 左右。 200W超高压汞灯的平均寿命，在每次使用 2h 的情况下约为 200h，开动 一次工作时间愈短，则寿命愈短，如开一次只工作 20min，则寿命降低 50%。因 此，使用时尽量减少启动次数。灯泡在使用过程中，其光效是逐渐降低的。灯熄灭 后要等待冷却才能重新启动。点燃灯泡后不可立即关闭，以免水银蒸发不完全而损 坏电极，一般需要等 15min。由于超高压汞灯压力很高，紫外线强烈，因此灯泡必 须置灯室中方可点燃，以免伤害眼睛和发生爆炸时造成操作。 倒置荧光显微镜由荧光附件与倒置显微镜有机结合构成的，主要用于细胞等 活体组织的荧光、相差观察。 倒置显微镜（ Inverted microscope ）是为了适应生 物学、医学等领域中的组织培养、细胞离体培养、浮游生物、环境保护、食品检验 等显微观察。由于这些活体被检物体均放置在培养皿（或培养瓶）中，这样就要求 倒置显微镜的物镜和聚光镜的工作距离很长，能直接对培养皿中的被检物体进行显 微观察和研究。因此，物镜、聚光镜和光源的位置都颠倒过来，故称为 倒置显微 镜 。倒置显微镜多用于无色透明的活体观察，在倒置显微镜的基础上添加一套荧 光附件：激光激发块，荧光光源，荧光照明器，激发块切换装置，即可进行倒置荧 光观察。 移液枪 移液枪是移液器的一种，常用于实验室少量或微量液体的移取，规格不同， 不同规格的移液枪配套使用不同大小的枪头，不同生产厂家生产的形状也略有不 同，但工作原理及操作方法基本一致。移液枪属精密仪器，使用及存放时均要小心 谨慎，防止损坏，避免影响其量程。 移液枪加样的物理学原理有下面两种：①使用空气垫 ( 又称活塞冲程 ) 加样； ②使用无空气垫的活塞正移动 (positivedisplacement) 加样。上述两种不同原理的 微量加样器有其不同的特定应用范围。 一、空气垫加样器 活塞冲程 ( 空气垫 ) 加样器可很方便地用于固定或可调体积液体的加样，加样 体积的范围在小于 1ul 至 l0ml 之间。加样器中的空气垫的作用是将吸于塑料吸头 内的液体样本与加样器内的活塞分隔开来，空气垫通过加样器活塞的弹簧样运动而 移动，进而带动吸头中的液体，死体积和移液吸头中高度的增加决定了加样中这种 空气垫的膨胀程度。因此，活塞移动的体积必须比所希望吸取的体积要大约 2 ％～ 4 ％，温度、气压和空气湿度的影响必须通过对空气垫加样器进行结构上的改良而 降低