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第二十七页，共42页。 形态发生方式（二） 胚状体方式　指由培养细胞诱导分化出的胚芽、胚根、胚轴的胚状结构，进而长成完整植株。 第二十八页，共42页。 第二十九页，共42页。 四、愈伤组织形态发生的调控 影响因子： （一）外植体本身 （二）培养基 （三）培养环境 第三十页，共42页。 愈伤组织培养愈伤组织培养主要教学内容愈伤组织的诱导与分化 愈伤组织的继代培养 愈伤组织的形态发生及调控 愈伤组织培养的应用 第一页，共42页。 主要教学内容 愈伤组织的诱导与分化 愈伤组织的继代培养 愈伤组织的形态发生及调控 愈伤组织培养的应用 第二页，共42页。 愈伤组织 第三页，共42页。 一、愈伤组织的诱导与分化 愈伤组织，原是指植物受伤之后于伤口表面形成的一团薄壁细胞，在组织培养中，则指外植体的增生细胞产生的一团不规则、疏松的薄壁细胞。 一般情况下，植物组织均能诱发形成愈伤组织。 由外植体形成愈伤组织，标志着组织培养的开始。 第四页，共42页。 愈伤组织的形成条件 一个成熟的植物细胞经历了脱分化之后，之所以还能再分化而形成完整的植株，是因为这些细胞具有全能性。 第五页，共42页。 外植体的选择与灭菌 植株茎的切段、叶、根、花和种子，或把其中的某些组织切成片或块状等均可作为外植体。 植物生长调节物质 通常情况下，诱导愈伤组织的培养基中都含有较高浓度的生长素(如2,4-D)和较低浓度的细胞分裂素(如6-BA)。 愈伤组织诱导成败的关键主要受外植体的类型及培养基组成，特别是激素的种类和浓度水平的影响。 第六页，共42页。 1、植物愈伤组织的形成结构 根据愈伤组织的性质和细胞组成的特点，可以将它们的结构分为致密和松散两种类型。 致密型 松散型 第七页，共42页。 2、愈伤组织形成的过程 外植体中已分化的活细胞，在外源激素的诱导下通过脱分化后形成愈伤组织，这一过程被大致划分为四个时期，即诱导期、分裂期、形成期和分化期。 第八页，共42页。 诱导期： 是细胞准备进行分裂的时期。 特点：代谢活化了，细胞内的合成代谢迅速进行，但细胞的大小和外植体时一样，没有多大改变。 第九页，共42页。 诱导期的长短： 由一系列内部（植物种类、生理状况）和外部因素（光照、外源激素）决定。 例如菊芋的诱导期有时还不需要1天，胡萝卜的诱导期则要好几天，但菊芋块茎经过5个月的贮藏后，诱导期则须延长到40h以上。 第十页，共42页。 可以从内外因两方面着手，改变诱导期长短 外因：添加生长激素如2,4－D来刺激处于静止状态的组织。 第十一页，共42页。 分裂期 是指细胞通过一分为二的分裂，不断增生子细胞的过程。 外植体的细胞一旦经过诱导，其外层细胞开始迅速分裂，使细胞脱分化。 在细胞分裂期，其形成结构和生理生化都发生深刻的变化： 第十二页，共42页。 1.数目迅速增加。 2.平均鲜重下降。 3.体积小，内无液泡。 4．核和核仁增大到最大。 第十三页，共42页。 形成期 是指外植体经过诱导期和分裂期后形成了无序结构的愈伤组织的时期。 这一时期愈伤组织内细胞的特点是： 　①大而不规则，高度液泡化，整个组织是比较松散的。 　②细胞增殖速度快,适合用液体培养或悬浮培养。 第十四页，共42页。 ③生长旺盛的愈伤组织呈乳黄色或白色，有光泽，也有浅绿色或绿色的；老化的愈伤组织多转变为黄色甚至褐色。 第十五页，共42页。 愈伤组织形成 第十六页，共42页。 分化期 是指停止分裂的细胞发生生理代谢变化，导致形成由不同形态和功能的细胞形成的愈伤组织。 第十七页，共42页。 第十八页，共42页。 分化期的主要表现： 细胞分裂部位和方向发生改变。 分化组织瘤状结构和维管组织的形成。 体积不再减小。 出现各种类型的细胞。 第十九页，共42页。 二、愈伤组织的继代培养 愈伤组织在培养基上生长一段时间以后，由于营养物质枯竭，水分散失，以及代谢产物的积累，必须转移到新鲜培养基上培养，即继代培养。 通过继代培养，可使愈伤组织无限期地保持在不分化的增殖状态。 第二十页，共42页。 由于代谢产物的积累会产生毒害作用，如果长时间不继代培养，就会使愈伤组织变成黑褐色，继而死亡。 用继代培养维持愈伤组织生长，是长期保存愈伤组织的一种方法。 第二十一页，共42页。 一般来说，愈伤组织的增殖生长只发生在不与琼脂接触的表面，而与琼脂接触的一面极少细胞增殖，只是细胞分化形成紧密的组织块。因此，由于愈伤组织的迅速增殖，整个愈伤组织小方块变成了一个不规则的馒头状的组织块。 它是愈伤组织表面或近表面瘤状物生长的结果。 第二十二页，共42页。 青苹果愈伤组织增殖培养 第二十三页，共42页。 乌桕愈伤组织增殖培