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实验专题模块三血液生化检验;血液是在心脏和血管腔内循环流动一个组织。成人血液约占体重十三分之一, 相对密度为1.050～1.060, pH值为7.3～7.4, 渗透压为313 mmol/L。 血液由血浆和血细胞组成。血浆内含血浆蛋白（白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原）、脂蛋白等多种营养成份以及无机盐、氧、激素、酶、抗体和细胞代谢产物等。 利用生物化学方法, 检测存在于血液中多种离子、糖类、脂类、蛋白质以及多种酶、激素和机体多个代谢产物含量, 叫做血生化检验。 在正常生理情况下, 其多种化学成份含量非常恒定。不过, 机体生理改变和病理情况, 可造成血液一些化学成份含量发生较大改变。所以分析血液化学成份能够了解人体物质代谢情况, 并帮助诊疗或者判定预后。 本专题将介绍血清蛋白与血尿素氮等两种生化指标检测, 使同学们对临床生化检验有一个初步了解。;试验一 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳 一、试验目 1. 掌握分离血清蛋白基础原理及其临床意义。 2. 了解醋酸纤维薄膜电泳方法及相关仪器操作。;二、背景与原理 血清蛋白pI都在7.5以下, 在pH为8.6巴比妥缓冲液中以负离子形式存在, 分子大小、形状也各有差异。所以在电场作用下, 可在醋酸纤维薄膜上分离成A、α1、α2、β和γ五条区带。电泳结束后, 将醋酸纤维薄膜置于染色液, 使蛋白质固定并染色, 再脱色（洗去多出染料）。将染色后区带分别用剪刀分离出来, 将其溶于碱液中, 进行比色测定, 最终计算出各区带蛋白质百分数。也可将染色后醋酸纤维薄膜透明处理后在扫描光密度计上绘出电泳曲线, 并可依据各区带面积计算各组分百分数。;;醋酸纤维素（二乙酸纤维素）薄膜含有匀一泡沫状结构, 渗透性强, 对分子移动无阻力, 用它作区带电泳支持物, 含有用样量少, 分离清楚, 无吸附作用。现在可用于血清蛋白、脂蛋白、糖蛋白、酶分离和免疫电泳等方面。 醋酸纤维素薄膜经1,4－二氧六环、透明液或液体石蜡处理即透明, 所以可得背景为无色电泳图谱。;四、 试验操作 1. 准备与点样: 1） 将薄膜切成2.5×8cm小块, 在薄膜无光泽面距一端1.5cm处用铅笔划一线, 表示点样位置。 2） 将薄膜无光泽面向下, 漂浮于巴比妥缓冲液面上（缓冲液盛于培养皿中）, 使膜条自然浸湿下沉。 3） 将充足浸透（指膜上没有白色斑痕）膜条取出, 用滤纸吸收多出缓冲液, 把膜条两端各贴于两块玻片上, 使点样线空架。 4） 用血色素吸管吸收人新鲜血清3～5ul, 涂于宽2厘米点样器末端处, 或用点样器在盛有血清小烧杯中蘸一下, 使其末端粘上薄层血清, 然后紧按在薄膜点样线上, 待血清全部渗透膜内, 移开点样器。;2. 电泳: 将点样后膜条置于电泳槽架上, 放置时无光泽面（即点样面）向下, 点样端置于阴极。槽架上以四层滤纸作桥垫, 膜条与滤纸需贴紧, 待平衡5分钟后通电, 电压为10V/cm长（指膜条与滤纸桥总长度）, 电流为0.4～0.6mA/cm宽, 通电一小时左右关闭电源。 3. 染色: 通电完成后用镊子将膜取出, 直接浸于盛有氨基黑10B染色液中, 染5分钟取出, 立刻浸入盛有漂洗液培养皿中, 反复漂洗数次, 直至背景漂净为止。用滤纸吸干薄膜。;4. 定量: 取试管6支, 编好号码, 分别用吸管吸收0.4N氢氧化钠4ml。剪开薄膜上各条蛋白色带, 另一空白部位剪一平均大小薄膜条（作为分光光度法调零管）, 将各条分别浸于上色述试管内, 不时摇动, 使蓝色洗出。约半小时后, 用分光光度计进行比色, 波长650nm, 以空白薄膜条洗出液为空白对照, 读取白蛋白、α1、α2、β、γ球蛋白各管吸光度值A。 5. 计算: 光吸收总和A总＝AA+Aα1+Aα2+Aβ+Aγ 各部分蛋白质百分数为: 白蛋白%= (AA / A总)×100%; ?1球蛋白%= (Aα1/ A总)×100%; ?2球蛋白%= (Aα2 / A总)×100%; ?球蛋白%= (Aβ / A总)×100%; ?球蛋白%= (A γ / A总)×100%;临床意义;试验二 血清尿素氮测定 一、试验目 1. 掌握血尿素氮定义及其测定意义。 2. 了解二乙酰一肟显色法原理与操作。;二、背景与原理 尿素生成是肝脏解毒功效之一。通常肾脏为排泄尿素关键器官, 尿素从肾小球滤过后在各段小管均可重吸收, 所以在血液中会有少许尿素存在, 通常见血尿素氮（BUN）来衡量。 肾小管内尿流速越快, 尿素重吸收就越少, 也即达成了最大清除率。假如肾功效出现了损害, 则有可能造成尿素排出降低, 或者是重吸收增多, 使得BUN升高。和血肌酐（SCR）一样, 在肾功效损害早期, 血尿素氮可在正常范围。当肾小球滤过率下降到正常50%以下时, 血尿素氮浓度才快速升高。正常情况下, 血尿素氮与