神经干细胞研究现状和应用前景.pptVIP

（1）反复传代法：取3～4个月龄的人胚胎纹状体或孕 14～16天小鼠、大鼠胚胎大脑，机械分离制作单细胞悬液。在含多种神经因子的无血清培养基中培养，实现NSC的体外稳定有效扩增。经过长期培养反复传代可使NSC得到纯化。 （2）流式细胞术：Sasaki等采用流式细胞仪对约60种细胞表面抗原进行筛选，结果发现分选出的具有CD133+/CE34+/CD45-（细胞表面抗原）的细胞为NSC。 （3）基因转导：Keyoung 等利用腺病毒为载体,将置于归巢素和Msi1增强子和启动子控制下的绿色荧光蛋白基因导入人胚胎细胞,然后对胚胎细胞进行体外培养,只有NSC能特异性地出现绿色荧光蛋白。再利用流式细胞仪进行荧光筛选,能进一步将NSC收集起来。 （4）免疫磁珠细胞分选法：利用磁珠表面的特异性抗体与NSC表面抗原结合，在磁场作用下使结合磁珠的NSC与其他细胞分离，从而得到较纯化的NSC。 神经干细胞的分离与纯化 神经干细胞的鉴定 　　1990年，Lendahl的实验证实，神经干细胞的标志蛋白是神经上皮干细胞蛋白（nestin）．Nestin在神经胚形成时开始表达，随着神经细胞的迁移和分化的完成，Nestin的表达量逐渐下降甚至完全停止。目前，Nestin已被用于神经干细胞的鉴定。 培养的小鼠神经干细胞　　　　　　胚胎小鼠脑侧室　　　　　　　　胚胎小鼠纹状体 Sakakibara等人鉴定出一种RNA结合蛋白即 Musashi ,可作为NSC的标志物。 (Sakakibara et al. 1996) E10 E14 Ventricular zone of spinal cord m-Msi-1 nestin (Sakakibara et al. 1996) 　　对分离培养得到的NSC进行标记时发现：Nestin和Musashi呈双重阳性,且随着NSC分化成为神经元,二者的标记作用也消失,说明Musashi具有与Nestin相似的特异性和种间保守性。Nestin和Musashi作为早期原始神经细胞的标志物已被广泛地应用于NSC的鉴定。 应用前景 NSC原位诱导内源性NSC的自身激活 　理论依据：大量体外和在体实验已经证实成年脑中存在NSC。研究影响NSC增殖和分化的信号作用的实验证实：脑室管膜下区等部位的NSC在脑损伤发生后能够增殖，并迁移到受损部位并分化成新的神经细胞，取代受损脑组织细胞。 　存在困难：在大多数情况下,仅由内源性干细胞产生的神经组织可能不足以替代损伤后缺失的神经组织,尤其在脊髓、纹状体等神经组织发生很少的部位。 　可能原因： (1)原位诱导出功能特异的神经元可能需要多种刺激和特定细胞因子的作用。(2)患者中枢神经系统的干细胞缺陷或无法激活。 神经干细胞研究现状和应用前景 主 要 内 容 基本知识 神经干细胞的定义、特点、标志、分布及分化因素等基本知识 成年神经干细胞的研究现状 研究方法 神经干细胞的来源、分离、培养及鉴定方法 神经干细胞技术在神经系统疾病治疗中的应用 神经干细胞与神经心理学 基本知识 干细胞（Stem cell，SC）是一类具有自我更新（self-renewing）能力的多潜能细胞，即干细胞保持未定向分化状态和具有增殖能力，在合适的条件或给予合适的信号，它可以分化成多种功能细胞或组织器官，医学界称其为“万用细胞”，也有人通俗而形象地称其为“干什么都行的细胞”。 干细胞来源于胚胎、胎儿组织和成年组织如骨髓、脐带等。干细胞技术最显著的作用就是：能再造一种全新的、正常的甚至更年轻的细胞、组织或器官。 干细胞技术是近年现代生物科技继克隆技术、基因工程之后的第三大科学成就。 它不仅促使人们重新熟悉细胞生长与分化的基本生命原理，也为多种难治性疾病的治疗带来了划时代的革命。21世纪是生命科学的时代，也是为人类的健康长寿创造世界奇迹的时代，干细胞的应用将有广阔前景。 干细胞的概念 神经干细胞的定义 1989年，Temple等从13天大鼠胚胎脑隔区取出细胞进行培养，发现这些细胞发育成神经元和神经胶质细胞。其后从成年鼠纹状体、海马齿状回等处分离出能在体外不断增殖，并具有向神经元和星形胶质细胞分化潜能的细胞群。 20世纪90年代后，许多实验都证实，人脑内也同样存在神经干细胞。 目前得到普遍认可的神经干细胞的概念是由Mckay在1997年提出的：神经干细胞(neural stem cell，NSC)是指具有分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的能力，能自我更新并能提供大量脑组织细胞的细胞群。 (Okano et al. 2002) 神经干细胞的分化、增殖及其影响因素 1． 生长