第三十七课时鉴定类实验学案.docVIP

第三十三课时——鉴定、提取、分离实验 （一、知识提纲） 考点一 生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定（B） 一、实验原理 可溶性还原糖与 试剂发生作用，生成 色沉淀；脂肪可以被 染成 色；蛋白质与 试剂发生作用，产生 色反应。 二．实验材料 1．可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜色为白色或近白色的植物组织，如苹果、梨。 2．做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡3~4小时（也可用蓖麻种子）。 3．做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。 三、方法步骤 （一）可溶性糖的鉴定 操 作 方 法 注 意 问 题 解 释 1. 制备组织样液。 （去皮、切块、研磨、过滤） 苹果或梨组织液必须临时制备。 因苹果多酚氧化酶含量高，组织液很易被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。 2. 取1支试管，向试管内注入2mL组织样液。 3. 向试管内注入1mL新制的斐林试剂，振荡。 应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存，使用前才将甲、乙液 量混匀成斐林试剂； 切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。 斐林试剂很不稳定，甲、乙液混合保存时，生成的Cu(OH)2在70~900C下分解成黑色 甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应，无Cu(OH)2生成。 4. 试管放在盛有50－650C温水的大烧杯中，加热约2分钟，观察到溶液颜色：浅蓝色 → 棕色 最好用试管夹夹住试管上部，使试管底部不触及烧杯底部，试管口不朝向人。 防止试管内的溶液冲出试管，造成烫伤； （二）脂肪的鉴定 操 作 方 法 注 意 问 题 解 释 花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片，将薄片放在载玻片的水滴中，用吸水纸吸去装片中的水。 干种子要浸泡3~4小时，新花生的浸泡时间可缩短。 因为浸泡时间短，不易切片，浸泡时间过长，组织较软，切下的薄片不易成形。切片要尽可能薄些，便于观察。 在子叶薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ染色3分钟或苏丹Ⅳ染液，染色1分钟。 染色时间不宜过长。 用吸水纸吸去薄片周围染液，用 50％酒精洗去浮色，吸去酒精。 酒精用于洗去浮色，不洗去浮色，会影响对橘黄色脂肪滴的观察。同时，酒精是脂溶性溶剂，可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。 用吸水纸吸去薄片周围酒精，滴上1~2滴蒸馏水，盖上盖玻片。 滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。 低倍镜下找到花生子叶薄片的最薄处，可看到细胞中有染成 色或 色圆形小颗粒。 装片不宜久放。 时间一长，油滴会溶解在乙醇中。 （三）蛋白质的鉴定 操 作 方 法 注 意 问 题 解 释 制备组织样液。 （浸泡、去皮研磨、过滤。） 黄豆浸泡1至2天，容易研磨成浆，也可购新鲜豆浆以节约实验时间。 鉴定。加样液约2ml于试管中，加入 ，摇匀；再加入 3~4滴，摇匀，溶液变紫色。 A液和B液也要分开配制，储存。鉴定时先加 液后加 液。 CuSO4溶液不能多加。 先加NaOH溶液，为Cu2+与蛋白质反应提供一个碱性的环境。A、B液混装或同时加入，会导致Cu2+变成Cu(OH)2沉淀，而失效。 否则CuSO4的蓝色会遮盖反应的真实颜色。 可用蛋清代替豆浆。 蛋清要先稀释。 如果稀释不够，在实验中蛋清粘在试管壁，与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上，使反应不容易彻底，并且试管也不易洗干净。 附：淀粉的检测和观察 用试管取2ml待测组织样液，向试管内滴加2滴碘液，观察颜色变化。 碘液不要滴太多 以免影响颜色观察 考点二 模拟尿糖的检测（B） 一、实验目的 学会尿糖的检测方法、检查“尿样”中是否含有葡萄糖。 二、实验原理 方法一、斐林试剂+葡萄糖 水浴 沉淀 葡萄糖葡萄糖酸+H2O 葡萄糖 葡萄糖酸+H2O2 葡萄糖氧化酶 H2O2 H2O+O 过氧化氢酶 有色化合物 无色化合物+O 三、实验步骤 方法一 （1）取样：正常人的尿液和糖尿病患者的尿液 （2）检测方法： 试剂（水浴加热）或尿糖试纸 （3）结果：（用斐林试剂检测）试管内发生出现砖红色沉淀的是 的尿液，未出现砖红色沉淀的是正常人的尿液。 （4）分析：因为糖尿病患者的尿液中含有还原糖，与斐林试剂发生反应产生砖红色沉淀，而正常人尿液中无还原糖，所以没有发生反应。 方法二 （1）将5个分别装有水、葡萄糖溶液、三份模拟“尿样”的滴瓶和5条葡萄糖试纸分别对应做好标记，并在记录本上设计好记录表格； 样品 水 葡萄糖溶液 模拟“尿样”1 模拟“尿样”2 模拟“尿样”3 颜色变化 （2）