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任务5 高效液相色谱法 别离原理 液相色谱分析法模块之 * 2021-5-18 理解分析方法中采用的色谱类型 能够正确解释色谱别离过程 能够根据组分性质选择适宜的色谱类型 能力目标 * 2021-5-18 课程引入 归一化法测定分析纯甲苯试剂的纯度 色谱柱: 4.6mm×150mm 固定相: 十八烷基硅烷键合相(ODS) 流动相: 水:甲醇=15:85 外标法测定叶酸片中叶酸的含量 色谱柱: 4.6mm×250mm 固定相: 十八烷基硅烷键合相(ODS) 流动相: 磷酸二氢钠缓冲液:甲醇=80:20 * 2021-5-18 液相色谱是如何完成混合物的别离？ 课程引入 混合物中各组分在固定相和流动相之间会发生吸附、溶解或其他亲和作用，这种作用存在差异，从而使各组分在色谱柱中的迁移速度不同得到别离 石油醚 碳酸钙颗粒 色素 玻璃柱 * 2021-5-18 液液分配色谱法 实例：归一化法测定分析纯甲苯试剂的纯度 色谱柱: 4.6mm×150mm 固定相: 十八烷基硅烷键合相(ODS) 流动相: 水:甲醇=15:85 液液分配色谱 * 2021-5-18 液液分配色谱法 固定相 将特定的液态物质涂于担体外表 化学键合于担体外表而形成的有机键合层 如C18〔十八烷基硅烷〕、 C8〔辛烷基〕、氨基键合硅胶 固定相类型 极性固定相：正相色谱 以极性有机基团如胺基〔-NH2〕、腈基〔-CN〕、醚基〔-O-〕等键合在硅胶外表制成的 非极性固定相：反相色谱 反相色谱法最常用的固定相是C18、C8和苯基键合相的填料，在别离极性很大的化合物时，也可以采用氨基、氰基等极性基团键合固定相。 液液分配色谱 * 2021-5-18 使用条件 为控制样品在分析过程的解离，常用缓冲液控制流动相的pH值，但需要注意的是，C18和C8使用的pH值通常为2.5~7.5〔2~8〕。 太高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH值会使键合的烷基脱落。 键合相色谱—固定相 特点 使用过程中不流失 均一性和化学稳定性好 重现性好别离效率高 适于梯度洗脱 传质阻抗小 * 2021-5-18 反相色谱 常见流动相 流动相洗脱强度顺序：水甲醇乙腈乙醇四氢呋喃丙醇二氯甲烷〔与水不混溶〕 假设采用含一定比例的甲醇或乙腈的水溶液作流动相，可用于别离极性化合物 假设采用水和无机盐的缓冲液为流动相，那么可别离一些易离解的样品，如有机酸、有机碱、酚类等 常见固定相 反相色谱法最常用的固定相是C18、C8和苯基键合相的填料，在别离极性很大的化合物时，也可以采用氨基、氰基等极性基团键合固定相。 键合相色谱—流动相 * 2021-5-18 疏溶剂理论： 当溶质分子进入极性流动相后,即占据流动相中相应的空间，而排挤一局部溶剂分子； 当溶质分子被流动相推动和固定相接触时，溶质分子的非极性局部或非极性分子〕会将非极性固定相上附着的溶剂膜排挤开，直接和非极性固定相上的烷基官能团相结合〔吸附〕形成缔合物，构成单分子吸附层； 当流动相极性减小时，这种疏溶剂斥力下降，会发生解缔，并把溶质分子释放而被洗脱下来 反相色谱法的别离机理1 * 2021-5-18 影响溶质保存的三个主要因素： 溶质分子中非极性局部的总外表积 溶质和固定相接触的总外表积愈大，保存值愈大，所以溶质的极性愈弱，疏水性越强，保存值越大。 键合相上的烷基总面积 烷基键合固定相的作用在于提供非极性的作用外表。随着碳链的加长，烷基的疏水特性增强，溶质的保存值也随烷基碳链长度的增加而增大。 流动相的外表张力 流动相的外表张力愈大，介电常数愈大，极性亦愈强；溶质和烷基键合相的缔合作用愈强，流动相的洗脱强度弱，导致溶质的保存值大。 反相键合相色谱法的别离机理2 * 2021-5-18 时间，min 固定相：C1 固定相：C8 固定相：C18 1-尿嘧啶；2-苯酚；3-乙酰苯；4-硝基苯；5-苯甲酸甲酯；6-甲苯 例：反相键合色谱中，键合相碳链越长，别离效果越好。 别离机理实例 * 2021-5-18 液液分配色谱 * 2021-5-18 其他类型色谱法 按别离机制分类： 液固吸附色谱法 离子色谱法 凝胶色谱法〔分子排阻色谱法〕 〔空间排阻色谱法〕 其他类型色谱法 * 2021-5-18 氯化噻吩嗪 四种异构体的别离色谱图 氯化噻吩嗪四种异构体的别离 异构体具有不同的空间排列方式，因此吸附剂对它们的吸附能力有所不同，从而得到了别离。 液固吸附色谱实例 * 2021-5-18 液固吸附色谱法 固定相：吸附剂为硅胶或氧化铝，粒度5-10μm 流