等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点教学提纲.pdfVIP

精品文档 实验三 等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点 一、实验目的 了解等电聚焦的原理。通过蛋白质等电点的测定，掌握聚丙烯酰胺凝胶垂直管式等 电聚焦电泳技术。 二、实验原理 等电聚焦（ Isoelectric focusing ，简称 IEF ）是六十年代中期出现的新技术。近年来 等电聚焦技术有了新的进展，已迅速发展成为一门成熟的近代生化实验技术。目前等电 聚焦技术已可以分辨等电点（ pI ）只差 0.001pH 单位的生物分子。由于其分辨力高，重 复性好，样品容量大，操作简便迅速，在生物化学、分子生物学及临床医学研究中得到 广泛的应用。 蛋白质分子是典型的两性电解质分子。它在大于其等电点的 pH 环境中解离成带负 电荷的阴离子，向电场的正极泳动，在小于其等电点的 pH 环境中解离成带正由荷的阳 离子，向电场的负极泳动。这种泳动只有在等于其等电点的 pH 环境中，即蛋白质所带 的净电荷为零时才能停止。如果在一个有 pH 梯度的环境中，对各种不同等电点的蛋白 质