分子生物学：第五章 DNA的复制.pptVIP

* * * * * 哺乳动物细胞中主要有5种DNA聚合酶 * * * * * * * * * * 哺乳类和其他脊椎动物的端粒为TTAGGG，串联重复500~3000次，序列长度在2kb到20kb之间不等。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 7种不同的亚单位，9个亚基。 * * * * * * * * * * * * 早在20世纪30年代，两名遗传学家Muller和Mcclintock分别在不同的实验室用不同的生物做实验发现染色体末端结构对保持染色体的稳定十分重要，Muller将这一结构命名为端粒（telomere）。 直到1985年，Greider等从四膜虫中真正证实了端粒的结构为极简单的6个核苷酸TTGGGG序列的多次重复，并发现了端粒酶 (telomerase) 。 端粒与端粒酶是当今生物学研究的热点。 端粒是位于真核细胞染色体末端的核酸－蛋白复合体,其功能在于维持染色体的稳定性和完整性。 端粒酶是一种核酸核蛋白酶，能以自身的RNA为模板合成端粒的重复序列，以维持端粒长度的稳定性。 许多研究表明，端粒、端粒酶的功能失调将影响细胞的生物学行为，包括细胞周期的稳定性、细胞增殖、癌变、凋亡、衰老。 端粒结构 5. 端粒的复制 端粒是染色体末端的重要标志。 人类端粒DNA由数百至数千拷贝的重复基序5’-TTAGGG-3’组成，并在双链分子3’端有一短的延伸序列。 端粒具有保护染色体免受伤害的功能，就像鞋带两端防止磨损的塑料套。 b. 端粒的延长由端粒酶催化 5. 端粒的复制 大部分端粒DNA在DNA复制中以正常方式被复制，但这并不是它合成的唯一方法。 端粒也可以由端粒酶所催化的独立反应延伸。 端粒酶：是一种通过合成端粒重复序列来维持真核生物染色体末端的酶。 b. 端粒的延长由端粒酶催化 端粒酶结构示意图 蛋白质 DNA RNA 端粒酶（Telomerase）：控制细胞衰老的定时机制 关于端粒和端粒酶的发现，在2009年获得了诺贝尔医学奖。 逆转录酶 2009年诺贝尔生理学或医学奖 Elizabeth H. Blackburn Carol W. Greider Jack W. Szostak (1) 人类的端粒酶中含有一个约450核苷酸长的RNA分子，其5’端具有 5’-CUAACCCUAAC-3’序列，该核心区域与端粒中的重复序列5’-TTAGGG-3’反向互补。 (2) 以该RNA分子作为模板，通过反复延伸与易位，将重复片段加到突出的3’端上。 端粒合成的过程： (3) 当端粒酶延伸3’端足够长度后，一个新的冈崎片段会被引发、合成，使3’延伸的片段转变为一个有部分3’端突出的双链末端。 端粒合成的过程： 在不同生物中，端粒重复序列及端粒酶RNA 尖毛虫 四膜虫 c. 如何防止端粒酶过度延长末端？ 端粒结合蛋白（TRF1） 端粒酶的活性必须进行非常小心的调控以保证每条染色体末端延伸适当的长度。 TRF1蛋白结合在端粒的重复序列上，促进折叠的染色质结构的形成，以此来阻止端粒酶接触染色体的末端。 当端粒缩短时，结合的TRF1蛋白的数量下降，染色质结构被打开，使得端粒酶可以接近染色体的末端并延伸端粒。 缺乏端粒酶活性的细胞每次分裂都会导致染色体缩短。 当染色体长度缩短到含遗传信息的DNA碱基时，细胞就会衰老死亡。 很多研究人员都相信，端粒的长短与细胞的寿命有着重要的联系。 而许多癌细胞之所以能够长久生存，就是因为它们能够利用端粒酶来不断的延伸端粒，成为永生不死的细胞。 d. 端粒长度和衰老、癌症有关 e. 端粒复制与其它部分DNA复制的异同点和生物学意义 6. 真核生物与原核生物DNA复制的比较 (1) 相同点： a. 半保留 b. 半不连续复制 c. 复制过程包括起始、延长和终止三个阶段 d. 要求有相应的蛋白质(如SSB)和酶(如DNA聚合酶)参与 (2) 不同点： a. 真核生物基因组比原核生物大得多，但它复制时每秒结合的核苷酸数比后者少。(50 bp/s, 1/20) b. 真核生物有多个复制起点，在一轮复制未完成前，不能进行新一轮复制。原核生物中，只有一个起始点，但复制起点可连续开始新的DNA复制，表现为虽只有一个复制单元，但可能有多个复制叉。 真核生物 原核生物 本章重点、难点： 基本概念：DNA半保留复制、前导链、后随链、冈崎片段、复制子、复制泡、引发体、复制体等； DNA复制的特点；原核生物DNA复制的过程及其与真核生物DNA复制间的比较；复制过程中涉及到的酶及其功能；端粒的复制。 * * * * * * * * * * * * * * * B. 末端标记法（ Klenow片段 ） 同位素标记的dNTP 3’ 5’ 随机引物法 C.