分子生物学：第四章 核酸的结构和性质.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 在近十余年的生命科学研究中非编码调控RNA可谓是研究最火的领域之一，从06年诺奖的siRNA，到这几年异常火爆的microRNA，到即将登场并定能风靡的lncRNA，可谓如火如荼。 * * * * * * * * 在近十余年的生命科学研究中非编码调控RNA可谓是研究最火的领域之一，从06年诺奖的siRNA，到这几年异常火爆的microRNA，到即将登场并定能风靡的lncRNA，可谓如火如荼。 作用机制： 1 编码蛋白的基因上游启动子区（橙色）转录，干扰下游基因（蓝色）的表达； 2 抑制RNA聚合酶II或者介导染色质重构以及组蛋白修饰，影响下游基因（蓝色）的表达； 3 与编码蛋白基因的转录本形成互补双链（紫色），干扰mRNA的剪切，形成不同的剪切形式； 4 与编码蛋白基因的转录本形成互补双链（紫色），在Dicer酶的作用下产生内源性siRNA； 5 与特定蛋白质结合，lncRNA转录本（绿色）可调节相应蛋白的活性； 6 作为结构组分与蛋白质形成核酸蛋白质复合体； 7 结合到特定蛋白质上，改变该蛋白质的细胞定位； 8 作为小分子RNA（如miRNA、piRNA）的前体分子。 * * * * DNA可以用碱变性而RNA不能采用碱变性,而一般用甲醛等变性 * * * * * * * * a) DNA片段的均一性 % dsDNA dsDNA的含量越高，Tm越大 b) (G+C)含量。DNA每增加1%的(G+C)含量，Tm值增加大约0.4 ?C。 Tm=69.3+0.41x(G +C)% (G+C)%=2.44x (Tm-69.3) c)介质的离子强度。介质的离子强度低时，Tm值也低，熔解温度范围也宽。 4) 环状DNA的变性： 如果两条链都是闭合环状的, 变性可以打破双螺旋结构，但两条单链相互缠绕在一起，不能分开。 如果其中一条或两条链上有切刻，两条链在热变性时将分开。 4. DNA复性 在一定条件下，变性的DNA的互补碱基对间氢键重新形成，恢复原来的双链状态，称为复性。热变性DNA经缓慢冷却后即可复性，也称为退火。 快速降温： 仅在局部区域发生碱基配对，重新形成双链。光吸收值下降很小。如dsDNA加热变性后将其迅速冷却至4℃以下，则不可能发生复性。比Tm低25℃为DNA复性的最佳条件。 慢速降温： 互补链相互配对，形成完全的双链DNA。光吸收值与原初样品相同。 核酸杂交： 利用变性、复性技术使不同来源的核酸互补序列结合形成双螺旋结构的过程。例：Southern杂交、Northern杂交。 核酸的分子杂交 (hybridization): 加热 双链DNA 单链DNA 杂交 杂合双链 在DNA复性过程中，双链分子的再形成既可以发生在序列完全互补的核酸分子之间，也可以发生在碱基序列部分互补的不同的DNA之间或DNA与RNA之间，这种现象称为分子杂交。 本章重点、难点： RNA稳定性较差的原因；核酸的二级结构：双螺旋模型、加卡夫法则、稳定力；三级结构：连接数、盘绕数、扭曲数，拓扑异构酶；回文序列；细胞内的RNA组分；理化特性和热力学特性：DNA纯度、变性（碱变性、化学变性、热变性）、复性，Tm。 * * * * * * * * * * * * * * * 伦敦大学 国王学院 1951年，沃森前往意大利参加生物大分子结构会议，威尔金斯作了关于X射线衍射图谱的报告吸引了他的兴趣。博士毕业后来到英国卡文迪什实验室，与克里克相遇，共同从事DNA结构研究。 1953年2月14日，威尔金斯由于以为沃森与克里克早已不做DNA结构的分析，因此将照片51号(1951年11月，富兰克林做的照片)拿给沃森过目，并且详细的解释相关的研究结果。 到了2月28日，沃森与克里克宣布他们发现了双螺旋模型，此时威尔金斯仍被蒙在鼓里。 《自然》期刊于1953年4月25日同时发表三篇论文，顺序是以沃森与克里克为先，再来是威尔金斯等人，最后是富兰克林。 1958年3月30日，富兰克林逝世（年仅37岁）。 1962年，Watson（美）和 Crick（英）与Wilkins共享Nobel生理医学奖。 2011年，新诺贝尔奖化学奖颁发给已去世多年的罗莎琳德·富兰克林，以表彰她对DNA分子结构发现所做出的贡献。 * 为什么嘌呤和嘧啶配对，而不是嘌呤和嘌呤、嘧啶和嘧啶配对。 * * * * * * DNA的右手螺旋并不是自然界DNA唯一存在的方式。右手螺旋结构是在生理盐水溶液中提取的DNA的结构，目前将这种结构称为B-DNA。 1979年，Alexander Rich发现了左手螺旋，称为Z-DNA，另外也有A-DNA的存在。 * * 核心八聚体 H2A, H2B, H3, H4各两个 DNA 核