分子生物学：第六章 DNA的损伤、修复与重组.pptVIP

RecA蛋白是一种形如纤维,每次通过最初形成单体进行伸长和收缩活动的蛋白,在修复受损DNA的过程中发挥重要作用。是recA基因的产物，分子量约38000D，为含４个亚基的四聚体。即使DNA分子有断裂或“空隙”，两个DNA分子也不一定重组。必须有推动重组反应的酶存在，重组才能进行。在这些酶中最主要的是RecA蛋白，它能促使两个同源DNA分子的碱基配对，形成杂种分子。 RecA的主要功能包括：（1）促进2个DNA分子之间链的交换；（2）作为共蛋白酶促进LexA 阻遏蛋白的自我水解 RecA的主要功能包括：（1）促进2个DNA分子之间链的交换；（2）作为共蛋白酶促进LexA 阻遏蛋白的自我水解 链的非准确转移，会导致突变机率的增加。 重组修复 D. SOS修复 指DNA受到严重损伤、细胞处于危急状态时所诱导的一种DNA修复方式，修复结果只是维持基因组的完整性，提高细胞的存活率，但留下的错误较多，故又称为错误倾向修复，使细胞有较高的突变率。 —SOS修复系统的调控： LexA蛋白抑制SOS修复相关基因的表达 激活的RecA可以酶解LexA蛋白 被LexA蛋白抑制的修复相关基因得以表达 二、DNA损伤的修复 RecA在SOS修复中起核心作用 RecA与LexA组成调控环路 DNA损伤 SOS 在DNA损伤修复后，SOS修复系统关闭。 SOS系统关闭后，RecA蛋白处于非激活状态，LexA蛋白重新处于激活状态。 大剂量的紫外线照射，大量的二聚体产生 SOS系统被诱导，使得错误潜伏的复制超越二聚体进行 错误碱基 SOS 修复是一种错误倾向性极强的修复机制，是进化中形成的“ 竭尽全力，治病救人” 的措施。 举例： 引入突变或变异 组氨酸 8字的双圈 核酸内切酶 切口 核酸外切酶 切除 聚合酶 合成 连接酶 连接 第六章　DNA的损伤、修复与重组 内　容 一、DNA损伤与突变 二、DNA损伤的修复 三、DNA的重组 一、DNA损伤与突变 DNA突变和重组是基因组进化的驱动力。 突变(mutation)：是一个DNA分子在碱基序列上发生的可遗传的变化，表现在碱基的改变或碱基数目的增加或减少上。 突变体(mutant)：不同于正常或野生型形式的个体。 　如：His-酵母，白眼果蝇 2. 突变的类型： 点突变：单个碱基的变化，碱基对既不增加也不减少，而是发生了替换 (substitution)： 转换(Transition)：嘧啶?嘧啶，嘌呤?嘌呤 A/T?G/C, T/A?C/G 颠换(Transversion)：嘧啶?嘌呤，嘌呤?嘧啶 A/T?C/G，T/A?G/C b) 碱基对的插入和缺失（indel） c) 染色体结构变异：片段缺失、重复、倒位、转座等 一、DNA损伤与突变 3. 突变的效应： 沉默突变(silent mutation)：不影响氨基酸序列。发生在非编码区，非调节区或密码子的第三位。 中性突变(neutral mutation)：突变的密码子编码不同但性质相似的氨基酸。 错义突变(missense mutation)：编码的氨基酸序列发生改变，可能无作用也可能致死。 一、DNA损伤与突变 d) 无义突变(nonsense mutation)：形成新的终止密码子，编码截短了的蛋白。 e) 移码突变(frameshift mutation)：碱基的插入或缺失引起读码框（ORF）的改变。 f) 温度敏感突变(temperature-sensitive mutation)：突变蛋白质在某一温度有活性，在另一温度下失活。 g) 渗漏突变 (leaky mutation)：某些氨基酸的变化使得蛋白活性显著降低，但不是完全丧失。 4. 突变产生的方式 一、DNA损伤与突变 自发突变和损伤 物理诱变和化学诱变 转座元件的插入导致突变 (1) 自发突变和损伤： 碱基结构互变 酮式(=O, =NH)?烯醇式(-OH, -NH2)，烯醇式T与G配对，烯醇式C与A配对 一、DNA损伤与突变 A 可以通过错配修复机制进行修复。 B. 复制错误未被DNA聚合酶所修复 C A 模板 C. 脱氨基 如果未被修复，产生的U会在接下来的复制中与A配对，产生点突变。 模板 C U D. 脱嘌呤 在嘌呤碱基和脱氧核糖之间的N-糖苷键断裂 X 模板 A 氧化碱基 E. 活性氧导致碱基的氧化损伤 在所有需氧细胞中由于超氧化物、氢过氧化物及羟基自由基等活性氧的存在，会在正常条件下发生氧化损伤。 8-氧化鸟嘌呤 2-氧化腺嘌呤 5-羟甲基尿嘧啶 (2) 物理诱变和化学诱变 A. 射线辐射 高能离子化辐射（如X射线，?射线），使目标分子失去电子，引起DNA发生广泛的化学变异，包括断链、碱基及五碳糖的损伤。 非离子化辐射可引起新的化学键形