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微生物鉴定之生化实验大全 入社群： 听大咖微课 +看医学视频 +会议直播微生物鉴定 之生化实验大全 不同的细菌具有各自的独特的酶系统，因而对底物的分解能 力各异，其代谢的产物也不相同。这些代谢产物又具有不同 的生物化学特性，可利用生物化学的方法测定这些代谢产物 以鉴定细菌。掌握各种生化反应的原理和应用是细菌鉴定的 基础。生理生化特性的测定主要根据 Shirling ＆Gottlieb 《International Journal of Systematic Bacteriology 》中鉴定 的有关试验。 （一）碳水化合物代谢实验： 糖（醇、苷）类发酵实验 （1 ）原理：细菌分解糖的能力与该菌是否含有分解某种糖 的酶密切相关，故分解糖的能力各不相同，细菌分解糖类后 的终产物亦不一致，在含糖培养基中加入指示剂，若细菌分 解糖则产酸或产酸产气，使培养基颜色改变，从而判断细菌 是否分解某种糖或其他碳水化合物。 （2 ）基本培养基： 在培养基中加入 0.5%-1% 的糖类 （单糖、 双糖、或者多糖） 、醇类（甘露醇、肌醇）苷类（水杨苷、 菊糖等）。培养基可为液体、半固体、固体或微量生化管几 种类型。 （3 ）实验方法：取某一种细菌的 24h 纯培养物分别接种到 葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖等培养基内， 37℃培 养 24h ，观察结果并记录。 （4 ）结果判定 如果接种进去的细菌可发酵某种糖或醇，则可产酸，使培养 基由紫色变成黄色，如果不发酵，则仍保持紫色。如发酵的 同时又产生气体，则在微量发酵管顶部积有气泡。 （5 ）应用：是鉴定细菌最主要最基本的实验，特别是对肠 杆菌科细菌的鉴定尤为重要。 氧化型与发酵型 (O/F) 的测定 （1 ）原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必需有氧的参加 的，称为氧化型，细菌在分解葡萄糖的过程中，可以进行无 氧降解的，称为发酵型。发酵型细菌无论在有氧或者无氧的 环境中都能分解葡萄糖。不分解葡萄糖的细菌称为产碱型。 这在区别微球菌与葡萄球菌、肠杆菌科成员中尤其有意义。 （2 ）培养基：培养基蛋白胨 2g ，氯化钠 5g ，磷酸氢二钾 0.3g ，葡萄糖 10g ，琼脂 3g ，1 ％溴麝香草酚蓝 3mL ，蒸馏 水 1000mL 。将蛋白胨、盐、琼脂和水混合，加热溶解，校 正 pH 至 7.2 ，然后加葡萄糖和指示剂， 加热溶解；分装试管， 3～4mL/ 管；115℃， 高压蒸汽灭菌 20min ，取出后冷却成琼 脂柱。 （3 ）实验方法：挑取 18 ～24h 的幼龄斜面培养物，穿刺接 种，每种细菌接种两管，于其中 1 管覆盖 1mL 灭菌的液体 石蜡， 37℃培养 24 小时或更长时间。 （4 ）结果判定。β 一半乳糖苷 (ONPG) 实验 （1 ）原理：有的细菌可以产生 β一半乳糖苷酶，能分解邻 －硝基酚－β－ D －半乳糖苷， 而生成黄色的邻－硝基酚， 在 很低浓度下也可以检测出。 （2 ）培养基：邻硝基酚 β-半乳糖苷 0.6g ，0 ．01mol ／L pH7 ．5 磷酸缓冲液 1 000mL ，pH 7 ．5 的灭菌 1％蛋白胨水 300mL 。 先将前两种成分混合溶解，过滤除菌，在无菌条件下与 1 ％ 蛋白胨水混合， 分装试管， 每管 2 ～3mL ，无菌检验后备用。 （3 ）实验方法：取一环细菌纯培养物接种在