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新书标记免疫节;体外分析技术;体外免疫分析技术示意图;第一节 放射免疫分析基础原理 (radioimmunoassay, RIA) ;一、放射免疫分析基础原理 放射免疫分析法是利用限量特异抗体与标识抗原和非标识抗原竞争结合反应, 经过测定放射性复合物量来计算出非标识抗原量一个超微量分析技术。 ;*Ag;Ag;放射免疫分析（RIA）特点: ;建立标准曲线;B/T×100%;二、 放射免疫分析基础条件特异性抗体、标识抗???、标准品、分离技术、放射性测量仪器 1、特异性抗体 高亲和力、高特异性、高滴度抗体。;（1）高亲和力抗体:  亲和力（Affinity)是指抗原和抗体之间一个结合能力。亲和力测定方法是: Scatchard作图,  以AgAb浓度为横坐标, 以B/F为纵坐标绘制直线, 观察直线斜率（-KA） 。标准曲线斜率越大, 表明抗体亲和力越高, 抗原抗体结合也越紧。;;（2）高特异性抗体:  抗体特异性(Specificity)指: 抗体分别与对应抗原和抗原结构类似物结合能力比较。 通常见交叉反应(Cross Reaction)来表示, 交叉反应越小, 抗体特异性越高。反之, 抗体特异性就差。;;（3）高滴度抗体:  抗体滴度(Titer)指抗体实际应用时稀释倍数。 稀释倍数越大, 抗体滴度越高, 滴度通常要求在1/1000以上为好。滴度曲线目: 确定抗体稀释度; 找出抗原和抗体最适百分比（B/T为50%时抗体稀释度）。 看一看抗体滴度曲线;抗体滴度曲线;2、标识抗原: ;;3. 标准品 ;4. 分离技术;2）沉淀法（聚乙二醇法）: 加入30%PEG, 经过吸水作用使蛋白质脱水, 致r球蛋白（B）沉淀优点: 能快速分离; 缺点: 非特异本底高。3） 吸附分离法（活性炭吸附法）: 吸附（F）部分（分子量小）, 离心后使F沉淀, B悬浮在溶液中。测定溶液部分放射性计数。优点: 能快速分离; 缺点: 非特异本底高。 ;4）双抗体沉淀法（PR试剂法）: 双抗法+PEG法结合, 融合了两种方法优点。第二抗体和PEG用量都降低优点: 能快速分离、特异性高、非特异本底低。是现在最好方法之一。5）固相分离法: ?试管固相法: 优点: 操作简便 缺点: 抗体吸附量小。?微球法和微粒法: 优点: 操作简便 、 抗体吸附量大。?磁性颗粒法: 优点: 操作简便 、快速、 抗体吸附量大; 5.放射性测量仪器:  依据不一样放射性核素选择不一样放射性测量仪器。 125I选择?-计数器进行测量。 3H选择液体闪烁计数器。; RIA基础操作步骤示意图; 单探头手动r-计数器;;;; （三）RIA质量控制 质量控制:就是利用部分客观指标, 常常对分析质量进行检验, 遇有质量异常则立刻采取对策, 以确保分析误差控制在可接收范围。质量控制目: ⑴确保试验分析误差控制在可接收范围。⑵判定试剂盒质量和方法学稳定性。;1.试验室内部质量控制: ;1）零标准管结合率（ Bo %）: 最大结合率;2）非特异性结合（NSB%）: ;3） ED25、ED50、ED75: ;用ED25、ED50、ED75值判定 曲 线 漂 移 情 况;4）标准曲线直线回归参数;2.评价RIA试剂盒质量指标;1） 精密度 (Precision)  是指同一样品反复测定实测值离散程度。离散程度越小, 表明分析系统精密度越高。常以变异系数（CV）表示。  CV%(变异系数）=标准差（S）/平均数×100%（1）精密度图: 用以判定分析系统复管变异情况(CV)应7%  通常都是两侧变异系数大, 尤其是低剂量区。见图;T4RIA精密度图;2）灵敏度 （Sensitivity) 就是指统计上能与零剂量相区分最小量。通常指测定方法最小可检出量。既B。×90%所对应值。3）正确度(Accuracy) 是指样品测定值偏离真值程度。（1）回收率: 回收率越靠近100%说明该方法正确度很好。 回收率=测定值/真实值×100%;3.试验室外部质量控制; 第二节: 免疫放射分析 （Immunoradiometric Assay, IRMA）; 二.基础方法（一）双抗体夹