荧光染料选择和数据分析.pptVIP

荧光素的选择原则 选择荧光素需要考虑 抗原的密度 高表达的抗原可选择几乎所有的荧光素 低密度表达的抗原需要可提供较高S/N比值的荧光素如PE/APC 选择荧光素需要考虑 自发荧光 每种细胞群都有不同水平的自发荧光 所有的荧光通道均可观察到自发荧光，但自发荧光强度在波长较长时迅速降低。 对自发荧光较强的细胞，选择发射波长长的荧光素（如APC）可得到较好的S/N比值。 对自发荧光比较弱的细胞，发射波长长的荧光素对S/N提高没有明显的改善。可选用FITC。 选择荧光素需考虑 非特异结合 许多荧光抗体可产生低水平的非特异结合，使阴性细胞群的荧光超出自发荧光。 非特异结合由下列因素引起 单克隆抗体的同型抗体：一些IgG同型抗体可能与一些细胞上的Fc 受体结合 所用的荧光素 羰花青染料（如CY3、CY5、CY5.5、CY7）和Tex-Red直标的抗体及一些复合染料标记的抗体在标记某些亚群的细胞时有时会提高结合率。 对CY5来说，是因为该染料与低亲和力FC受体的极低亲和力相互作用。这也是复合染料PE-CY5的特性。 选择荧光素需考虑 复合染料：小心信号衰退 复合染料因为光、固定剂或温度升高会致信号衰退，使复合染料在上一级染料处发光。该种现象从一小部分亚群开始，导致APC或PE染色细胞群假阳性。 减少样本暴露于光、高温或固定剂，可很大程度上避免这一问题。 选择染料时要考虑：复合染料