微生物菌种分离及纯化方法计划.docx

微生物菌种分离及纯化方法计划 微生物菌种分离及纯化方法计划 PAGE / NUMPAGESPAGE 微生物菌种分离及纯化方法计划 . 从混淆微生物集体中获取只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分别与纯化。 在 分子生物学的研究及应用中， 不单需要经过分别纯化技术从混淆的天然微生物群中分别出特 定的微生物，并且还一定随时注意保持微生物纯培育物的“贞洁”， 防备其余微生物的混入。 1、用固体培育基分别和纯化 单个微生物在适合的固体培育基表面或内部生长、 生殖到必定程度能够形成肉眼可见的、 有 必定形态构造的子细胞生长集体， 称为菌落。当固体培育基表面众多菌落连成一片刻， 便成 为菌苔。不一样微生物在特定培育基上生长形成的菌落或菌苔一般都拥有稳固的特色， 能够成 为对该微生物进行分类、判定的重要依照。大部分细菌、 酵母菌、以及很多真菌和单细胞藻 类能在固体培育基上形成孤立的菌落， 采纳适合的平板分别法很简单获取纯培育。 所谓平板， 即培育平板的简称，它是指固体培育基倒入无菌平皿，冷却凝结后，盛固体培育基的平皿。 这方法包含将单个微生物分别和固定在固体培育基表面或里面。 固体培育基用琼脂或其余凝 胶物质固化的培育基，每个孤立的活微生物体生长、生殖形成菌落，形成的菌落便于移植。 最常用的分别、培育微生物的固体培育基是琼脂固体培育基平板。这类由 Kock成立的采纳 平板分别微生物纯培育的技术简易易行， 100多年来向来是各样菌种分别的最常用手段。 稀释倒平板法 第一把微生物悬液作一系列的稀释（如 1:10、1:100、1:1000、1:10000），而后分别取不 同稀释液少量，与已融化并冷却至 50℃左右的琼脂培育基混淆，摇匀后，倾入灭过菌的培 养皿中，待琼脂凝结后， 制成可能含菌的琼脂平板，保温培育一准时间即可出现菌落。 假如 稀释合适，在平板表面或琼脂培育基中即可出现分别的单个菌落， 这个菌落可能就是由一个 细菌细胞生殖形成的。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，即可获取纯培育。 涂布平板法 由于将微生物悬液先加到较烫的培育基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡， 且采纳稀释 倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺少氧气而影响其生长， 所以在微生物 学研究中常用的纯种分别方法是涂布平板法。其做法是先将已融化的培育基倒入无菌平皿， 制成无菌平板，冷却凝结后，将必定量的微生物悬液滴加在平板表面， 再用无菌玻璃涂棒将 菌液平均分别至整个平板表面，经培育后挑取单个菌落（图 1）。 ;.. . 图1涂布平板法 平板划线法 最简单的分别微生物的方法是平板划线法，即用接种环以无菌操作沾取少量待分别的资料， 在无菌平板表面进行连续划线（图 2），微生物细胞数目将跟着划线次数的增添而减少，并 逐渐分别开来，假如划线适合的话， 微生物能一一分别， 经培育后，可在平板表面获取单菌 落。有时这类单菌落并不是都由单个细胞生殖而来的， 故一定频频分别多次才可获取纯种。 其 原理是将微生物样品在固体培育基表面多次作“由点到线”稀释而达到分别目的的。 划线的 方法好多，常有的比较简单出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、 四格法等。 图2平板划线法 稀释摇管法 ;.. . 用固体培育基分别严格厌氧菌有特别性， 假如该微生物裸露于空气中不立刻死亡， 能够采纳 往常的方法制备平板，而后置放在关闭的容器中培育， 容器中的氧气可采纳化学、 物理或生 物的方法消除。关于那些对氧气更加敏感的厌氧性微生物， 纯培育的分别则可采纳稀释摇管 培育法进行，它是稀释倒平板法的一种变通形式。 先将一系列盛无菌琼脂培育基的试管加热 使琼脂融化后冷却并保持在50℃左右，将待分别的资料用这些试管进行梯度稀释，试管迅 速摇动平均，冷凝后，在琼脂柱表面倾倒一层灭菌液体白腊和固体白腊的混淆物， 将培育基 和空气分开。培育后，菌落形成在琼脂柱的中间。 进行单菌落的挑取和移植，需先用一只灭 菌针将液体白腊 --白腊盖拿出，再用一只毛细管插入琼脂和管壁之间，吹入无菌无氧气体， 将琼脂柱吸出，置放在培育皿中，用无菌刀将琼脂柱切成薄片进行察看和菌落的移植。 2、用液体培育基分别和纯化 大部分细菌和真菌，用平板法分别往常是满意的， 由于它们的大部分种类在固体培育基上长 得很好。但是迄今为止其实不是全部的微生物都能在固体培育基上生长， 比如一些细胞大的细 菌、很多原生动物和藻类等，这些微生物仍需要用液体培育基分别来获取纯培育。 稀释法是液体培育基分别纯化常用的方法。 接种物在液体培育基中进行次序稀释， 以获取高 度稀释的成效，使一支试管中分派不到一个微生物。 假如经稀释后的大部分试管中没有微生 物生长，那么有微生物生长的试管获取的培育物可能就是纯培育物。 假如经稀释后的试