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实时定量pcr引物tm值和溶解曲线横坐标的tm是一回事么
实时定量pcr引物tm值和溶解曲线横坐标的tm是一回事么
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实时定量pcr引物tm值和溶解曲线横坐标的tm是一回事么
实时定量pcr引物tm值和溶解曲线横坐标的tm是一回事么
TM是当50%的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度。Tm对于设定PCR退火温度是必需的。
Tm可采用下列公式计算:Tm=2(A+T) + 4(G+C)。
不一样的,引物的Tm是引物本身的解链温度,软件一般会自动给出。溶解曲线横坐标的Tm是PCR产物的解链温度,所以一般是比引物本身的Tm值大的。
就是说你的反应体系在80度时50%的DNA解链啊。因为你用的模版应该的都是一种或者亲缘关系较近的生物的,所以基本上都是这个值。不同生物的基因组的Tm值是不一样的。
不一样,你用的是什么方法啊染料还是探针啊如果是单独合成的引物,那就是引物的Tm,这个就是你设计引物时软件上给你的Tm。方便你设计反应体系的退火温度。一般情况下,这个值也只是个参考值,要想获得好的结果是需要摸条件的。分子就是烧钱的货,不要怕花钱哈……ps.定量要的是曲线,所以退火温度什么倒不是主要的,主要的是你引物的特异性,千万不能有杂带。先跑个常规pcr看看比较好
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