《基因工程实验》实验教学大纲.docx

第 PAGE \* Arabic 1 页/ 共 NUMPAGES \* Arabic 8 页 《基因工程实验》实验教学大纲 课程名称：基因工程实验 ???????????????课程类别：专业主干课 适用专业：生物技术??????????????????? 考核方式：考查 总学时、学分： 　32学时 1学分? ????? 一、实验课程简介 基因工程又称遗传工程、DNA重组技术、分子克隆等。它是上个世纪七十年代在分子生物学发展的基础上形成的新学科。所谓的基因工程，就是在分子水平上，用人工的方法提取或者合成某一生物的遗传物质，在体外切割，拼接和重新组合，然后通过载体把重组的DNA分子引入受体细胞，使外源DNA在受体细胞中进行复制和表达。按照人们的意愿创造生物新性状，使之稳定的遗传给下一代。所以基因工程具有广阔的应用前景，既能为工农业生产和医药保健等开拓新途径，又能为生物的细胞分化，生长发育，肿瘤发生等基础研究提供有效的实验手段。目前，基因工程实验技术已经成为生物学领域许多实验室的常用技术，也可以说是生物技术的核心技术，是生物技术专业学生必须掌握的内容。本课程通过对一些基本的基因工程实验技术的操作，使学生得到初步的锻炼，为以后从事生物工程领域的相关科研、教学及生产工作奠定基础。 二、 实验课性质、目的和任务 性质：课程内实验 目的：通过本课程的实验使学生掌握基因的转化、基因的扩增和重组体的筛选与检测技术。 任务：学习感受态细胞的制备、重组质粒对感受态细胞在热应激状态下的转化、质粒的提取与纯化技术、质粒的酶切与电泳检测技术 三、本课程实验教学目的与基本要求 ??实验教学目的：掌握大肠杆菌细胞的培养与感受态细胞的制备技术；掌握质粒转化、提取、纯化、酶切、电泳等实验技术；了解基因工程操作的一般程序。 基本要求：要求学生有强烈的事业心，热爱生物技术专业、理论和实践相结合，更深入的理解和掌握基因工程原理与技术。实验中要认真、仔细，爱护公共财产，并能严格遵守课堂纪律，以保证顺利完成每次实验。 四、实验项目与学时分配 实验项目名称 学时 类型 每组人数 质粒DNA的提取 3 创新性 6 DNA的酶切、电泳鉴定 3 创新性 6 目的基因的PCR扩增 4 创新性 6 DNA片断的体外连接 6 创新性 6 感受态细胞的制备 6 创新性 6 重组体的筛选检测 6 创新性 6 外源基因表达与鉴定 6 创新性 6 合计 34 ? ? ? 五、 实验教学的内容与基本要求 1、实验项目名称：质粒DNA的提取（3学时） ? ?实验目的：熟练掌握抽提细菌质粒DNA的一般方法。 实验类型：综合实验 必修或选修:必修 使用的主要仪器：超净工作台，接种环，酒精灯，台式离心机，旋涡混合器，微量移液取样器，微量离心管，恒温摇床，摇菌试管，试管架，标签纸，磁力搅拌机。 使用的主要试剂：质粒载体菌,LB培养基，葡萄糖/Tris/EDTA(GTE)溶液（溶液 I），NaOH/SDS溶液(溶液 II)，KAc溶液（pH4.8）(溶液 III)，RNase A，95%乙醇，70%乙醇，TE buffer（pH8.0）。 2、实验项目名称：DNA的酶切、电泳鉴定（3学时） 实验目的：掌握限制性内切酶切割质粒DNA的原理与操作步骤；掌握DNA琼脂糖凝胶电泳技术；学会DNA琼脂糖凝胶电泳回收技术。 实验类型：综合实验 必修或选修:必修 使用的主要仪器: 旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，l微量离心管，恒温水浴锅。 使用的主要试剂：质粒，EcoR I，内切酶缓冲液，电泳加样缓冲液。 3、实验项目名称：目的基因的PCR扩增（4学时） 实验目的：了解PCR扩增DNA的原理，掌握PCR技术的操作步骤。 实验类型：综合实验 必修或选修:必修 使用的主要仪器: 旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，PCR微量管，PCR仪，台式离心机，琼脂糖凝胶电泳系统，恒温水浴。 使用的主要试剂： Taq DNA聚合酶，PCR缓冲液，dNTP，引物，模板质粒，无菌dd water。 4、实验项目名称：DNA片断的体外连接（6学时） 实验目的：熟悉DNA体外连接的原理，掌握连接的步骤。 实验类型：综合实验 必修或选修:必修 使用的主要仪器: 旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，微量离心管，台式离心机，干式恒温气浴等。 使用的主要试剂：酶切载体，插入片断，T4 DNA 连接酶，连接酶缓冲液，无菌dd Water。 5、实验项目名称：感受态细胞的制备（6学时） 实验目的：学习感受态细胞的制备方法 ????? 教学基本要求：掌握大肠杆菌细胞的培养和感受态细胞的置备技术实验内容提要：应用大肠杆菌菌株 DH5α作为受体细胞在液体培养基中进行培养，当 OD值达到要求后离心收获细胞，加入 CaCl并置冰浴中